药用真菌猪苓菌核无机磷酸盐转运蛋白基因的分子克隆与特性分析

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1、药用真菌猪苓菌核无机磷酸盐转运蛋白基因的分子克隆与特性分析刘蒙蒙邢咏梅王爱荣郭顺星中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室江苏理工学院电气信息工程学院生物信息与医药工程研究摘要：目的克隆猪苓Polyporusumbellatus菌核无机磷酸盐转运蛋白基因并进行生物信息学和表达模式分析。方法采用RT-PCR技术从猪苓菌核中克隆得到1个无机磷酸盐转运蛋白(inorganicphosphatetransporter)基因，利用牛物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构

2、域、信号肽和跨膜结构等分子特性;采用ClustalW2以及MEGA6.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;实时荧光定量PCR分析基因表达模式。结果猪苓无机磷酸盐转运蛋口基因命名为PuPiT(NCBI登录号:KU179154)。该基因开放读码框全长为1590bp,编码530个氨基酸。PuPiT蛋白相对分子质量为57552,等电点6.82。氨基酸序列分析表明，PuPiT蛋白具有12个跨膜区。氨基酸序列多重比对及系统发育树结果显示PuPiT与Moniliophthorarorer亲缘关系最近,与Mo

3、niliophthoraroreri>双色蜡蘑Laccariabicolor>Heterobasidionirrcgularc有较高的同源性，荧光定量PCR结果表明，PuPiT在与蜜环菌共生的猪苓菌核及未与蜜环菌共生的菌核中都有表达，其中共牛部分的表达量显著上调，约是未共牛部位的12倍，说明其参与猪苓与蜜环菌共生过程。结论puPiT基因克隆和分子特征为进一步研究揭示其在猪苓菌核磷元素转运及与蜜环菌共生过程屮的调控作用奠定基础。关键词：猪苓菌核;无机磷酸盐转运蛋白;基因克隆;表达分析;实时荧光定量PC

4、R;作者简介：刘蒙蒙，男，博士，研究方向为药用真菌学。E-mai1:1iuermengmeng@hotmai1.com作者简介：郭顺星，男，博士，研究员，博士生导师，研究方向为药用植物菌根生物学。Tel/Fax:(010)57833231E-mail:sxguol986@163.com收稿日期：2017-04-16基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程经费资助(2017-I2M-3-013)Molecularcloningandcharacterizationofaninorganicphosp

5、hatetransporterproteinencodinggeneinPolyporusumbellatusLIUMeng-mengXINGYong-meiWANGAi-rongGUOShun-xingKeyLaborstoryofBioactiveSubstoncesandResourceUtilizationofChineseHerbalMedicine,MinistryofEducation,InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcadem

6、yofMedicalSciencesPekingUnionMedicalCollege;Abstract：ObjectiveTocloneaninorganicphosphatetransporter(PiT)genefromPolyporusumbellatusandperformthebioinformaticsandexpress!onmodeanalysis.MethodsUsingRT-PCR.toclonethefull-lengthcDNAofPiT.Thecharacteristic

7、sofphysiochemicalproperties,conserveddomains,signalpeptideandtransmembranedomainofthepredictedPiTproteinweredeterminedbyusingbioinformatictools.ResultsAinorganicphosphatetransporter(PiT)gene(NCBT:KU179154),designatedasPuPiT,wasclonedfromPolyporusumbell

8、atussclcrotieibyRT-PCR.ThefullopenreadingframecDNAsequenceofPuPiTwas1590bp,encodingaputativePiTproteinwith530aminoacidswithamolecularweightof57552,andatheoreticalpIof6.82.Theaminoacidspossess12membrane-spanningdomains.Phylogenetictreean