西洋参协同蜂胶增强荷瘤小鼠免疫功能的实验研究

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1、西洋参协同蜂胶增强荷瘤小鼠免疫功能的实验研究【】目的：观察西洋参增强蜂胶提高肝癌移植瘤(HepA)小鼠免疫功能的作用。方法：实验设阴性对照组(蒸馏水)、蜂胶对照组（2.0g/kg体重）、蜂胶西洋参低、中、高三个剂量组（分别为0.5、1.0、2.0g/kg体重），相当于人体临床用量的7.5、15和30倍。结果：与阴性对照组比较，蜂胶西洋参中、高二个剂量组可明显提高荷瘤小鼠血清溶血素水平、小鼠NK细胞活性和ConA诱导的脾淋巴细胞转化，差异均有显著性(P

2、洋参各组对HepA肿瘤的抑制率在10%～14%，但与阴性对照组比较无明显差异（P＞O.05）。结论：西洋参可增强蜂胶提高肝癌移植瘤(HepA)小鼠的免疫功能。　　【关键词】蜂胶；西洋参；调节免疫；抗肿瘤　　　　蜂胶在我国市场出现只有40多年历史，这是由于中华蜂不产蜂胶，所以从意大利蜂引进我国才产蜂胶。蜂胶在2005年作为中药材收录中国药典，目前国内产品多以单纯蜂胶制成的保健品为主，将蜂胶与西洋参配伍进行产品研发报导很少，本文将蜂胶、蜂胶西洋参组合物灌胃肝癌移植瘤小鼠，并采用血清溶血素测定、NK细胞活性测定、ConA诱导的脾淋巴细胞转化功能测定和肿瘤抑制率测定，观

3、察其对免疫功能的影响及抗肿瘤作用，期望为蜂胶配伍西洋参的产品研发提供实验依据，现将结果报告如下：　　1实验动物和检测条件　　实验动物用ICR种小鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级，雌性，体重20±2g。饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14924-1994。检测环境条件：温度91-93℃，相对湿度60-65%。动物于试验前在动物房环境中适应3天　　2实验药物和剂量设计　　2.1蜂胶:采自养蜂场的原蜂，由杭州天厨蜜源保健品有限公司提供。将蜂胶经乙醇提纯，经冷冻干燥制成纯蜂胶。纯蜂胶与淀粉按2：1混合，加入粉碎机中打成200目蜂胶粉，冷贮备用。　　2.2西洋

4、参：购自吉林省宏久生物科技股份有限公司的西洋参提取物。　　2.3受试药的配制：将蜂胶粉与西洋参提取物以3：1的比例混合均匀，临用时用蒸馏水配制成5g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml浓度。蜂胶对照组采用蜂胶粉，临用时用蒸馏水配制成5g/ml浓度。　　2.4实验设三个蜂胶西洋参剂量组、一个蜂胶对照组和一个蒸馏水对照组。低、中、高三个蜂胶西洋参组剂量分别为0.5、1.0、2.0g/kg体重(相当于人体临床拟用量的7.5、15和30倍)，蜂胶对照组剂量为蜂胶粉2.0g/kg体重，蒸馏水对照组每日灌胃蒸馏水20ml/kg体重。给药前24小时以上各组动物均皮下接种H

5、epA细胞(2×107/ml)0.2ml/只。　　3实验方法　　3.1小鼠血清溶血素测定(血凝法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续10天。在试验第6天，每鼠腹腔注射0.2ml2%(V/V)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。4天后，取血离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，37℃温箱孵育3小时，观察血球凝集程度，计算抗体积数。　　3.2NK细胞活性测定（LDH测定法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续10天。在试验第11天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，在200目尼龙X袋内轻轻捻压，过滤，制成单细胞悬液，计数，用RPMI1640完

6、全培养液调整细胞浓度为5×±1O6个/ml。试验前24小时将YAC-l细胞(靶细胞)传代培养，应用前用Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为l×lO5个/ml。取靶细胞和脾细胞悬液(效应细胞)各1OOul(效靶比50：1)，加入U型96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各10Oul，靶细胞最大释放孔加靶细胞和l%NP40各1Ooul。上述各项均设三个复孔，于37℃、5%CO2培养箱中培养4小时，离心，每孔吸取上清1OOul置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应3分钟，每孔加入1mol/L的HCI30ul，测光

7、密度(OD)值，计算NK细胞活性。　　3.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的测定：各组灌胃给样品，每天1次，连续10天。动物颈椎脱臼处死，取脾脏，在200目尼龙X袋内轻轻捻压，过滤，制成脾细胞悬液，用无菌Hanks液洗2次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×107个/ml，将细胞悬液加入96孔培养板中，每一份脾细胞悬液3孔，每孔0.1ml，每孔再加入含ConA（浓度10ug/ml）的RPMI1640完全培养液0.1ml。培养板置5%CO2，37℃培养72h。培养结束前16h，每孔加入3H-TdR20μl，使其终浓度为3.7×104Bq/ml。用多头

8、细胞收集器收集细胞于玻璃