黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究论文

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1、黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究论文王庭欣王庭祥吴广臣刘峥颢夏立娅【摘要】目的研究黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响。方法采用ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验及迟发性变态反应试验测试黄芪多糖(AstragalusPolysaccharideAPS)对小鼠细胞免疫功能的影响；采用抗体生成细胞检测及半数溶血值实验测试黄芪多糖对小鼠体液免疫的影响；采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验测试黄芪多糖对小鼠非特异性免疫的影响。结果黄芪多糖能明显提高小鼠的足跖肿胀度、脾脏生成抗体细胞数、半数溶血值及巨噬细胞吞噬功

2、能，黄芪多糖对小鼠淋巴细胞增殖能力无明显影响。结论黄芪多糖对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫及巨噬细胞功能均有明显的增强作用。【关键词】黄芪；小鼠；多糖；免疫Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofastragaluspolysaccharide(APS)onimmunologicalfunctioninmice.MethodsBylymphocytetransformationtestanddelayedtypehypersensitivity(DTH)

3、,theeffectofAPSoncelluarimmunityiningplaqueformingcells(PFC)andHC50,theeffectofAPSonhumoralimmunityenmacrophagesofmicedevourchickenredcellacrophages.Resultsparedalcontrolgroup,APScouldpromoteDTH,PFC,HC50andphagositosisofperitonealmacrophages,buthadno

4、effectonlymphocyteproliferation.ConclusionAPScanstimulatetheimmunologicalfunctioninmiceindifferentmunity黄芪属豆科多年生草本植物，其主要含有多糖、谷甾醇、棕榈酸、胆碱、黄酮类等营养素，能镇静中枢神经系统，清除体内脂质过氧化物，具有较强的抗氧化作用［1，2］。本实验研究黄芪多糖对正常小鼠的免疫功能的影响，旨在探讨黄芪多糖对机体的免疫调节作用。1材料1.1试药黄芪多糖本实验室自制.freelg/k

5、g.bethyl-thiazo1-2yl)2,5-diphenyltetrazoliumbromide］、PRMI-1640培养粉、刀豆蛋白A(ConA)为Sigma公司产品。2方法2.1迟发性变态反应(DTH)（足跖增厚法）小鼠腹腔注射2%(V/V)羊红细胞SRBC0.2ml，致敏后4d，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20μl20%SRBC，注射后于24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量3次，取平均值。以攻击前后足跖厚度的差值(足距肿胀度)来表示DTH的程度。2.2ConA诱导的小鼠

6、淋巴细胞转化试验无菌取脾，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hanks液洗3次，然后将细胞悬浮于2ml的完全培养液中，调整细胞浓度为2×106个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加50μlConA(相当于5μg/ml)，另一孔作为对照，置5%CO237℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不加小牛血清的RPMIl6A0细胞培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml盐酸异丙醇，吹打

7、均匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个标本分装3孔作为平行样，在酶联免疫检测仪上比色测定，波长570nm。2.3脾脏抗体生成细胞检测每只鼠经腹腔注射2%SRBC0.2ml免疫5d后，取脾，制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后，与等量双倍Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl10%SRBC、10μl脾细胞悬液，混匀倾倒于琼脂糖玻片上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后加补体，继续温育1.5h，计数溶血空斑数。2.4半数溶血值(HC50)的测定每只鼠经

8、腹腔注射2%(V/V)SRBC0.2ml免疫5d后，取血，制备血清，用SA缓冲液将血清200倍。取1ml加入10%SRBC0.5ml，补体1ml。另设不加血清的对照管。置37℃水浴中保温30min，冰浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清1ml，都氏试剂3ml于试管内。同时取10%SRBC0.25ml，加都氏试剂至4ml，于另一试管内充分混匀，放置1min。于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值，按下式计算HC50。HC50=(黄芪多糖光密度值÷SRBC半数溶血时的光密