蜂胶配伍西洋参调节免疫功能实验探究.doc

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1、蜂胶配伍西洋参调节免疫功能实验探究关键词蜂胶西洋参调节免疫协同作用实验研究蜂胶是蜜蜂从植物芽胞或树干上采集的树脂，混入自身分泌物形成的一种胶状物质，具有多种保健功能，目前社会上习惯将其与西洋参配伍，用来滋补身体。为观察两者对调节免疫功能的协同作用，笔者进行了小鼠血清溶血素测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验(DTH)、NK细胞活性测定刀豆球蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞转化测定的实验研究，现将结果报告如下。1材料和方法1.1实验动物和检测条件：实验动物用昆明种小鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级，雌性，体重

2、20±2g。饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14924-1994O检测环境条件：温度91〜93°C,相对湿度60%〜65%。动物于试验前在动物房环境中适应3天。1.2实验药物和剂量设计：蜂胶：采自养蜂场原胶，由杭州天厨蜜源保健品有限公司提供。给药前将蜂胶加入粉碎机中打成200目蜂胶粉，冷贮备用。西洋参：购自吉林省宏久生物科技有限公司的西洋参提取物。受试药的配制：将蜂胶粉与西洋参提取物以3:1的比例混合均匀，临用时用蒸馆水配制成5g/mh2.5g/mh1.25g/ml浓度。实验设三个剂量组：低剂量组、中剂量组、高剂量组和一个给予蒸馅水的阴性对照组

3、。低、中、高三个剂量分别为0.5、1.0、2.Og/kg体重（相当于人体临床拟用量的7.5、15和30倍），阴性对照组每日灌胃蒸馆水20ml/kg体重。1.3实验方法：分述如下。1.3.1小鼠血清溶血素测定（血凝法）：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。在试验第25天，每鼠腹腔注射0.2ml2%（V/V）压积绵羊红细胞（SRBC）悬液，进行免疫。5天后，取血离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，37°C温箱孵育3小时，观察血球凝集程度，计算抗体积数。1.3.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（半体内法）:各组灌胃给样品,每天1次，连续30天。动物处

4、死前40分钟，每鼠腹腔内注射20%（V/V）鸡红细胞悬液lml，处死后再注入2ml生理盐水，取腹腔液滴片，TTC温箱孵育30分钟，固定染色，镜检，计数100个巨噬细胞，计算吞噬率及吞噬指数。1.3.3二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验（耳肿胀法）：各组灌胃给样品,每天1次，连续30天，在试验第25天，每鼠腹部涂50H1二硝基氟苯溶液（涂皮前24小时脱毛，面积约3cmX3cm）o5天后用二硝基氟苯溶液10卩1涂抹于小鼠右耳进行攻击，24小时处死动物，剪下耳壳，用打孔器取下直径8nmi的耳片，称重。1.3.4NK细胞活性测定（LDH测定法）：各组灌胃给样品

5、，每天1次，连续30天。在试验第30天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用蹑子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为5X106个/ml。试验前24小时将YAC-1细胞（靶细胞）传代培养，应用前用Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1X105个/mlo取靶细胞和脾细胞悬液（效应细胞）各100u1（效靶比50：1）,加入U型96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各1000LI1,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP4O各100ulo上述各项

6、均设3个复孔，于37°C.5%C02培养箱中培养4小时，离心，每孔吸取上清100卩1置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100ul,反应3分钟,每孔加入lmol/L的HCI30U1,测光密度（0D）值，计算NK细胞活性。1.3.5ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的测定：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。动物颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为2X106个/ml,将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔lml,一孔加50uIConA液（相当于5ug/ml）,另一孔作为对照，于5%C02,371培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸

7、去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的PRM1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50ul/孔，继续培养4h,培养结束后，每孔加入lml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解后，以570nm波长进行比色。1.3.6统计学处理：计量数据采用x±s表示，采用方差分析，P<0.05为有统计学差异。2实验结果2.1对小鼠血清溶血素影响：结果见表lo与阴性对照组(蒸馆水)比较，中、高2个剂量组能提高小鼠血清溶血素抗体积数水平，差异均有显著性(PV0.05)。2.2对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响：结果见表2。中、高2个剂量组小鼠腹腔巨噬细胞

8、吞噬鸡红细胞的吞噬率、吞噬指数和阴性对照组(蒸馆水)比较，差异均有显著性(P<0