山仙颗粒对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究

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1、山仙颗粒对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究【摘要】　　目的观察山仙颗粒对荷瘤小鼠免疫系统的影响。方法纯系BALB/c小鼠30只，用U14瘤细胞荷瘤建立动物模型，随机平均分为3组：山仙颗粒治疗组、环磷酰胺治疗组、生理盐水对照组。观察山仙颗粒对荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞转化率、TNF-α等免疫指标的影响。结果山仙颗粒能够显著提高治疗组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞转化率和血清中TNF-α，IL-2的含量。结论山仙颗粒能够显著提高荷瘤小鼠免疫系统的活性。【关键词】山仙颗粒小鼠肿瘤免疫　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofShanx

2、ianGranuleonimmunesystemintumor-bearingmice.MethodsMMTmethodatecelltoxicactionofShanxianGranule.AftertheanimalmodelofmousebearingtumorsationefficiencyoflymhocyticcellandthecontentofTNF-α.ResultsShanxianGranulecouldsignificantlyincreasetheNKcellactivityandtransformationefficiencyoflymph

3、ocyticcell,elevatethecontentsofTNF-α,IL-2intumorbearingmice.ConclusionShanxianGranulecanenhancetheactivityofimmunesystemintumor-bearingmice.　　Keyor;Immunity　　正气亏虚,血行淤滞是肿瘤发生与转移的基本病机。癌症患者常常免疫功能低下，加之放、化疗对全身免疫系统的损伤，患者血中吞噬细胞的活性与吞噬杀伤作用均有不同程度降低，此即中医所说的正气亏虚。由于免疫功能低下，免疫细胞难以识别和杀灭存在于血液循环中的具有转移能力的

4、癌细胞而使癌细胞扩散，故气虚血淤是肿瘤发生与转移的主要病机，这也是癌症晚期患者最常见的证型。笔者总结多年的临床经验,潜心研究,研制出补气活血之山仙颗粒,临床观察有防止肿瘤复发与转移作用。经动物实验证实［1，2］,山仙颗粒能分别从提高红细胞免疫、抑制IV型胶原酶表达、提高吞噬细胞功能、抑制肿瘤血管生成等方面对抗癌细胞侵袭与转移。为深入探讨其抗癌转移机理,本实验对山仙颗粒对荷瘤小鼠肿瘤免疫系统的影响做了进一步研究。现报道如下。　　1器材与方法　　1.1材料　　1.1.1动物纯系BALB/a小鼠，体重18～22g,6～7周龄，雌雄各半。　　1.1.2山仙颗粒山仙颗粒由陕西

5、中医学院附属医院制剂中心提供，每10g山仙颗粒相当于11.5g生药，用生理盐水配制成1.2g/ml的混悬液待用。　　1.1.3瘤株U14(小鼠腹水型宫颈癌细胞)、YAC-I（小鼠淋巴瘤细胞）购自陕西省中医研究院动物中心。　　1.1.4试剂与仪器RPMI-1640；Gibco刀豆蛋白A（ConA）；sigma产四甲基偶唑蓝（MTT）；Flu-ka产PCH-100电脑CO2孵育培养箱；TNF-α，IL-2试剂盒，上海森雄科技实业有限公司产品；奥地利产SUTSPECTRA2酶标仪。　　1.2方法取U14瘤株生长最佳状态的传代细胞，按细胞数1×106/ml，0.2ml/小鼠

6、腹腔注射，24h后随机分组。山仙颗粒组0.4ml/d灌胃，1次/d，连续7d；生理盐水（NS）组用无菌NS，途径、剂量、方法、次数同山仙颗粒组；环磷酰胺（CY）组用环磷酰胺0.4mg/ml，途径、剂量、方法、次数同山仙颗粒组。于接种瘤株后第12天各组小鼠分别摘除眼球取血，之后再脱颈处死取脾进行下一次实验。　　1.2.1NK细胞杀伤活性的测定小鼠脱颈处死后无菌取脾，制成单个脾细胞，用无菌三蒸水休克红细胞30s，迅速加入等量的1.7%无菌盐水恢复等渗，台朌蓝拒染计数活细胞在95%以上，与YAC-1一起加入96孔培养板（效靶比20∶1），各设3个复孔，MTT法检测NK细胞

7、活性。NK细胞活性（%）=靶细胞对照孔A值（实验孔A值-效应细胞孔A值）/靶细胞对照孔A值×100%。　　1.2.2淋巴细胞增殖反应的测定按上述方法制备脾细胞，浓度为5×106/ml,加入96孔培养板，每孔200µl，实验孔每孔再加50µl/mlConA20µl，对照孔加培养液20µl,置37℃CO2孵育培养箱中培养68h，离心取上清100µlMTT测A值，计算淋巴细胞增殖率。淋巴细胞增殖率（%）=实验孔A值/对照孔A值×100%　　1.2.3荷瘤小鼠血清TNF-α含量测定用TNF-αELISA试剂盒，