巴豆生物碱对肺腺癌细胞凋亡的影响及机制研究

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1、巴豆生物碱对肺腺癌细胞凋亡的影响及机制研究[摘要]目的研究巴豆生物碱(CA)对肺腺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响，推测其抗肺癌作用机制。方法体外培养肺腺癌细胞(A549)。用终浓度分别为0(对照组)、10、50、100Pg/mL的CA组处理A549细胞24h后，于相差显微镜下观察细胞的一般形态结构、脱落情况等；MTT法检测细胞的生长活性；流式细胞仪检测细胞凋亡率；酶联免疫法(ELISA)和RT-PCR法检测凋亡相关蛋白及基因Bcl-2、Bax的表迗。结果10、50、100ug/mL的CA均能抑制A549细胞增殖，其抑制率与作用剂量相关。流式细

2、胞术检测显示不同剂量CA作用于A549细胞24h后，100ug/mL的CA可引起细胞凋亡，其余剂量未见凋亡；100yg/mL的CA组细胞凋亡率为(45.940±0.031)%，对照组细胞凋亡率为(3.450±0.012)%,差异有统计学意义(P[Keywords]Crotonicalkaloids；Lungadenocarcinoma；Apoptosis；Mechanismofaction近年来，大家开始对巴豆及其提取物的抗肿瘤作用进行研究。巴豆生物碱(crotonicalkaloids,CA)具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。巴豆是一种流传于民间，用

3、于抗癌的中草药偏方，为大戟科植物巴豆的干燥成熟种子，可生用、炒焦用或制霜用。民间早已应用巴豆的提取物治疗恶性肿瘤，其提取物对胃癌、肝癌及甲状腺癌等多种肿瘤均具有治疗作用，其能缓解晚期胃癌患者的症状，减慢病程的进展，减少转移。相关文献资料关于CA抗癌作用机制的研究甚少，鲜有报道。查阅国内外文献，CA对于胃癌、卵巢癌、肠癌等均有抗癌作用，但尚未见有关抗肺癌作用的报道。本实验采用体外肺癌细胞培养，研究CA对肺癌细胞（A549）增殖和凋亡的影响，初探CA对肺癌的治疗作用及有效作用机制。1材料与方法1.1试剂与耗材肺腺癌细胞株（A549细胞）取自青岛市中心

4、医院肿瘤生物治疗中心。DMEM培养液（美国Hyclone公司）；胎牛血清（美国Hyclone公司）；0.25%胰蛋白酶（美国Hyclone公司）;DMS0（美国Hyclone公司）；流式细胞术所需材料（中国森雄公司）；RNAisoReagent（购自Takara公司）；琼脂糖、DNAMarker2000、氯仿、异丙醇（上海生物工程有限公司）；LoadingBuffer（大连宝生物工程有限公司）；内参GAPDHcDNA引物序列；Bax、Bcl-2引物序列（上海生物工程有限公司合成）;逆转录试剂盒及PCR试剂盒（购自Fermentas中国公司）；巴豆

5、生物碱。Bax:GAGGAACTGGACAGTAACATGGAGCT；CG-GCCCCAGTTGAAGTTGCBcl-2GCCGGTTCAGGTA-CTCAGTCATC；GTCACCTTCACCGTTCCA。GAPDH：GCACCGTCAAGGCTGAGAAC；ATGGTGGTGAAGAC-GCCAGT□1.2试验方法体外培养肺腺癌细胞（A549）。用终浓度分别为0（对照组）、10、50、100ug/mL的CA组处理A549细胞24h后，于相差显微镜下观察细胞的一般形态结构、脱落情况等；MTT法检测细胞的生长活性；流式细胞仪（AnnexinV-P

6、I染色）检测细胞凋亡率；酶联免疫法（ELISA）和RT-PCR法检测凋亡相关蛋白及基因Bel-2、Bax的表达。1.3统计学方法采用SPSS17.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数土标准差（x土s）表示，采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P0.05）。见表3。表3不同剂量CA对A549细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响（X士S）注：与对照组比较，*P0.05）。见表4。表4不同剂量CA对A549细胞Bel-2、BaxmRNA表迗的影响（x土s）注：与对照组比较，*P0.05）;RT-PCR结果显示，100Ug/mL的C

7、A组BaxmRNA表达增加，Bel-2mRNA表迖减少，差异有统计学意义（P0.05）；由结果推测CA能抑制A549细胞的生长并促进其凋亡，其发生与Bax蛋白及基因的表达上调和Bcl-2蛋白及基因的表迗下调有关。本研究发现，CA能抑制肺腺癌(A549细胞)的生长并促进其凋亡，其发生与Bax蛋白及基因的表达上调和Bcl-2蛋白及基因的表达下调有关。CA抗肺癌的作用机制可能主要通过Bax/Bcl-2途径促进肿瘤细胞凋亡，从而迗到治疗作用。那么CA作为一种中药，可以治疗肺癌，同时提示可能通过针对作用于Bcl-2家族蛋白，Bax/Bcl-2途径作为靶向途

8、径，起到治疗作用，为临床治疗肺癌提供了一种新的临床思路。[参考文献][1]郁仁存.中医药防治肿瘤的作用和展望[J].中国中西医结合杂志，