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1、桂枝甘草汤方药半仿生提取醇沉法最佳醇沉浓度的优选Abstract：ObjectiveTooptimizethealcoholconcentrationofGuizhiGancaoDecoctionextractedbysemi-bionicalcoholicextraction(SBAE).MethodsExtractsi-bionicextractiontechnologyandthebestbinationmethod.ThecontentsofGlycyrrhetinicAcid,CinnamicAcid,totalflavones,vol
2、atileoilanddryextractintheeachextractined.ResultsprehensiveevaluationYof70%alcoholicSBAEextracti-bionicextraction；alcoholconcentration桂枝甘草汤由桂枝、炙甘草组成,具有补心助阳、生阳化气、补阳扶中的作用。根据半仿生提取法(SBE)理论[1-5],在用均匀设计优选出桂枝甘草汤方药SBE法工艺条件和最佳组合方式的基础上[6-7],为进一步优选该方半仿生提取醇沉法(SBAE)的最佳醇沉浓度,笔者以甘草次酸、肉桂酸、总黄酮
3、、干浸膏得率为指标,对该方药做了各种醇沉浓度的平行对照试验,现报道如下。 1仪器与试药pHS-3C型精密pH计(上海雷磁仪器厂)；MA110型电子分析天平(上海第二分析仪器厂)；LXJ-Ⅱ型离心沉淀机(上海第三分析仪器厂)；754紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；VP高效液相色谱仪(SHIMADZUCorporationassembledinCHINA),SPD-10A检测器,LC-10AT泵；KQ-250E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；RE-52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。实验用药材经山东中医药大学张
4、兆旺教授鉴定。桂枝为樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥嫩枝；甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauraLensisFisch.的干燥根及根茎。炙甘草：取炼蜜,加适量冷开水稀释后,淋入净甘草片中,拌匀,闷润,置炒制容器内,用文火加热,炒至老黄色,不粘手时取出,晾凉(每100kg甘草片用炼蜜25kg)。甘草次酸、肉桂酸、柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号分别为723-200109、0786-9802、722-200107)。甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.
5、1提取液的制备将处方药材分别粉碎,按处方比例(桂枝∶甘草＝2∶1)称取药材粗粉240g(过10～20目筛)。用优选出的组合方式,即桂枝与甘草混煎的方式,用SBE法提取(双提法；第1煎用水用0.1moL/LHCl调至pH为2.04,第2、3煎用水用0.1moL/LNaOH调至pH为7.25、8.51；加水量依次为药材重量的10、8、8倍；煎煮时间依次为190、95、45min；双提法提取的挥发油单独存放),分别滤过,离心,合并上清液,水浴浓缩至800mL。取浓缩液100mL共6份,调pH值为7.5,加入95%的乙醇调至醇浓度为30%、40%、50%
6、、60%、70%、80%,冷藏放置24h,离心,上清液回收乙醇至无醇味后,分别用蒸馏水定容至100mL(每1mL相当于原药材0.3g)。 2.2供试液的制备精密量取提取液各10mL,加水35mL,缓缓加入盐酸4mL,静置30min,待气泡消失后,再加盐酸1mL、氯仿30mL,水浴加热回流1.5h,放冷,移至分液漏斗中,静置,分取氯仿层,水层用氯仿萃取(20mL×2),回收氯仿,残渣用无水乙醇定容至10mL,得供试液A(每1mL相当于原药材0.3g)。精密量取提取液各15mL,分别置蒸发皿中,加硅藻土4g,拌匀,水浴蒸至近干,80℃烘干,研细,加
7、乙酸乙酯40mL,超声提取20min,滤过,回收乙酸乙酯,残渣用甲醇定容至5mL,得供试液B(每1mL相当于原药材0.9g)。精密量取提取液各25mL,分别置蒸发皿中,加硅藻土4g,拌匀,水浴至近干,80℃烘干,研细,用甲醇100mL索氏回流5h(提至无色),滤过,用甲醇定容至100mL,得供试液C(每1mL相当于原药材0.075g)。 2.3对照品溶液的制备精密称取甘草次酸对照品1.70mg,用无水乙醇配制成0.34mg/mL的溶液。精密称取肉桂酸对照品2.20mg,用甲醇配制成0.22mg/mL的溶液。精密称定柚皮苷对照品2.00mg,用甲
8、醇配制成1.00mg/mL的溶液。 2.4甘草次酸的含量测定 2.4.1色谱分析条件 检测波长250nm；柱温：35℃；灵敏度：1
