基因组改组技术选育嗜果糖、耐so2葡萄酒酵母

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1、基因组改组技术选育嗜果糖、耐S02葡萄酒酵母LANZHOUUNIVERSITYOFTECHNOLOGY毕业设计（论文）学生姓名学号专业班级指导教师学院答辩H期摘要以C-1、02、C-3、C-4四株酵母菌作为出发菌株，用紫外线和化学诱试剂进行诱变，分别用含高浓度S02和果糖的培养基筛选，获得2株S02耐受性提高的菌株C-2-4和C-4-2和2株果糖利用率提高的菌株C-1-8和03-1。再以这4株菌株作为正突变库，通过两轮的基因组改组，获得5株耐S02性能和嗜果糖性能都较好的酵母菌株。其中第一轮改组后的菌株A-2对S02的耐受性与C-4-2相

2、比提高59.7%,A-7利用果糖特性与C-1-8相比提高了20%。第二轮改组后的菌株B-1的耐S02特性与C-4-2相比提高了14%,利用果糖特性与C-1-8相比提髙了34%o关键词：葡萄酒酵母；基因组改组；耐S02;嗜果糖；原生质体融合AbstractByUVinducedmutagenesisandchemicalmutagenesismethodsofwineyeaststrainC-l,C-2,C-3andC-4?andscreeningonnutrientmediumcontaininghighconcentrationsofS

3、O2andfructose,weobtained2SO2toleranceimprovedstrainsC-2-4andC-4-2andtwofructoseutilizationincreasingstrainsC-l-8andC-3-1.Wemadeuseofgenomeshuttingtothelibraryof4generateimprovedstrainsinthiswork.Weshuffedtwicetheseimprovedstrainbyprotoplastfusionandfinallyobtained5strains

4、withhigherSO2toleranceandaddictedtofructose.TheSO2toleranceofthefirstroundofthereconstitutedstrainA-2improved59.7%comparedwiththeC-4-2,A-7featurestheuseoffructoseincreasedby20%comparedwithC-l-8.TheSO2toleranceofthesecondroundofGenomeShufflingstrainB-lhasa14%increasecompar

5、edwiththeC-4-2,andtheuseoffructosecharacteristicsincreasedby34%comparedwithC-l-8.Keywords:Wineyeast;GenomeShuffling;ResistancetoSO2;Addictedtofructose;Protoplastfusion2摘S1Abstract母育育5种6种6种种术一、综5（一）葡萄酒酵5（二）葡萄酒酵母菌种的选51.自然选2.诱变育3.杂交育4.细胞融合育75.基因工程育7（三）基因组改组技71.Genomeshufflin

6、g技术的具体力•2.Genomeshuffling的优点、8（四）酵母菌对S02的耐受性及研究现8（五）酵母的嗜果糖特性及研宂现8（六）本课题的研究目的和研究意义8二、材料与方…8（一）材...81•菌…82.试剂和药8料株品（二）实验方法91.出发菌的选92.出发菌株对S02耐受性实马佥93.果糖耐受性实验94.发酵液中果糖的测定(半胱氨酸一咔唑比色法)95.紫外线诱10(1)诱变剂量的确10(2)诱变处理方沈101.化学诱10(1)诱变剂量的确定10(2)诱变处理方法102.嗜果糖诱变株的筛$103.耐SO2诱变株的筛104.第一轮融

7、10(1)菌体前培养10(2)原生质体的制10(1)原生质体的形成率和再生率计11(2)原生质体灭'活11(3)原生质体融合及初筛