根霉与酵母原生质体二次基因改组选育高酶活力菌株研究【开题报告】

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1、毕业论文开题报告食品科学与工程根霉与酵母原生质体二次基因改组选育高酶活力菌株研究1.课题研究意义及国内外研究现状酵母菌(Yeast)是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物。可在缺氧环境中生存。目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子(子囊孢子和担孢子)的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过芽殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”。目前已知大部分酵母被分类到子囊菌门。酵母菌在自然界分布广泛，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，例

2、如，在水果、蔬菜、蜜饯的内部和表面以及在果园土壤中最为常见。而再酿酒中，它也十分重要。而且猫吃了还会胀大，非常的危险。最常提到的是酿酒酵母（也称面包酵母）(Saccharomycescerevisiae)，自从几千年前人类就用其发酵面包和酒类，在酦酵面包和馒头的过程中面团中会放出二氧化碳。因酵母属于简单的单细胞真核生物，易于培养，且生长迅速，被广泛用于现代生物学研究中。如酿酒酵母作为重要的模式生物，也是遗传学和分子生物学的重要研究材料。酵母菌中含有环状DNA质粒，可以用来作基因工程的载体。根霉(Rhizopus)是一种好

3、气性真菌，分类学归属于半知菌亚门、曲霉属。根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。根霉的孢子可以在固体培养基内保存，能长期保持生活力。根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，是酿造工业中常用糖化菌。我国最早利用根霉糖化淀粉（即阿明诺法）生产酒精。根霉能生产延胡索酸、乳酸等有机酸，还能产生芳香性的酯类物质。根霉亦是转化甾族化合物的重

4、要菌类。与生物技术关系密切的根霉主要有黑根霉、华根霉和米根霉。2.课题研究的主要内容、预期目标和研究方案主要内容：1.菌体培养基的制备、灭菌，亲本菌种的杂交。2.杂交代多个后代菌株进行形态特征分析。3.杂交代后代1，3,5蛋白酶活力、淀粉酶活力、糖化酶活力、SDS电泳。2.2预期目标1.获得酵母、根霉二次融合后代菌株进行形态生理生化分析，了解后代遗传形态2.获得酵母、根霉二次融合后代菌株进行蛋白酶活力、淀粉酶活力、糖化酶活力、SDS电泳，得出数据于各个菌株进行比较。研究方案：1菌种的活化与扩大培养：YPD培养基活化菌种，

5、PDA培养基扩大菌种。1.1将准备好的菌种在无菌室超净工作台上接种于马铃薯固体培养基上，浇制2到3个。将接种好的培养基倒置于30℃恒温培养箱中黑暗培养3—5天。2菌落形态特征的观察2.1观察平板培养基上菌落蔓延状况、疏松程度，表面湿润或干燥，有无光泽，隆起形状,边缘的整齐度、大小、颜色等。3菌体形态特征的观察3.1显微镜观察菌种的形状及出芽方式。4蛋白酶活力测定:通过透明圈测定法测定菌种蛋白酶活力的测定。酶活力大小通过HC值来评定HC值=透明圈直径/菌落直径。5淀粉酶活力测定:通过透明圈测定法测定菌种淀粉酶活力的测定.酶

6、活力大小通过HC值来评定HC值=透明圈直径/菌落直径。6SDS电泳：通过SDS电泳测定蛋白质种类和蛋白质分子量。制胶板的安装（短玻璃面朝内），要求密封，以免胶液泄漏。配制适量（如7.5ml）的一定浓度的分离胶，将配制好的分离胶加入制胶槽中，注意应随着边缘缓慢加入，千万别进气泡。凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳子齿0.5cm处。轻轻在分离胶溶液上覆盖一层双蒸水封胶，使凝胶表面变得平整，静放30min~1小时，使凝胶聚合。除去上面的水层，再用滤纸吸尽残留的液体。配制5%的浓缩胶（3ml）迅速将配制好的浓缩胶添加到分

7、离胶表面，并将梳子插入凝胶内，至梳子齿的底部与前玻璃板的顶部平齐，小心避免混入气泡。将凝胶垂直放置于室温下，约30min凝胶聚合。凝胶聚合后，即可进行电泳。电泳、染色和脱色。课题进度计划2009年9月—2009年10月文献检索，收集资料，完成开题报告2009年10月—2009年11月菌丝的培养及提取2009年11月—2010年2月进行蛋白酶、淀粉酶、、SDS电泳的实验2010年3月—2010年4月毕业论文的初稿2010年5月完成毕业论文4.参考文献[1]HopwoodDA,WrightHM.Geneticrecombin

8、ationthroughprotoplastfusioninStreptomyces[J].JGenMicrobiol,1979,111(1):137-143.[2]梁平彦,刘宏迪.展青霉和产黄青霉的种间体细胞杂交[J].微生物学报,1982,22(3):248-256.[3]彭帮柱，岳田利，袁亚宏等.酵母菌原生质体