外治法对实验性兔膝骨性关节炎滑膜中bfgf表达的影响.doc

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1、城市管理工作总结XX年，全市城市管理工作按照市委、市政府提目的：了解外治法对碱性成纤维细胞生长因子在实验性兔膝骨性关节炎滑膜中的表达分布情况的影响，探讨中医外治法治疗骨性关节炎的机理。方法：32只实验动物随机分为正常组、模型组、扶他林组和外治法组，采用股静脉结扎方法造模成功后，治疗1个月。用免疫组化SABC方法对实验动物膝关节滑膜bFGF的表达分布进行观察。结果：造模组24只动物膝关节滑膜中bFGF免疫组化阳性率为92%,且外治法组表达强于扶他林组和模型组。正常组8只动物的膝关节滑膜中免疫组化为阴性。结论：外治法能够促进实验

2、动物膝关节滑膜bFGF的表达，从而为外治法治疗骨性关节炎在细胞因子水平提供理论依据。关键词：骨性关节炎；外治法；碱性成纤维细胞生长因子；滑膜骨性关节炎(osteoarthritis,0A)是一种慢性关节病，又称退行性关节病、增生性关节病等。其特征是关节软骨发生原发性或继发性退行性变，并在关节边缘有骨赘形成。本病的病理变化以关节软骨变性及软骨下骨质病变为主。中医外治法治疗0A有显著疗效［1-2］。碱性成纤维细胞生长因子能够诱导外胚层和中胚层来源的细胞增殖和分化，具有强大的促有丝分裂的作用，且在软骨损伤后的修复中有很重要的作用。

3、本实验通过检测bFGF在兔关节滑膜中的表达及分布，拭图探讨中医外治法治疗0A的机理。1材料实验动物健康雄性新西兰大耳白兔32只，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心，质量〜kg。实验试剂及仪器bFGF一抗、SABC试剂盒、DAB显色盒均购自武汉博士德生物工程有限公司；扶他林乳胶剂购自湖北省中医医院。熏洗中药购自湖北武汉定康大药房，方剂采用湖北省中医医院成方伤科熏洗汤。中药组成：芜活12g、独活12g、桂枝10g、桑枝30g、伸筋草10g、透骨草10g、花椒10g、艾叶10g、五加皮12g、海桐皮12g、白笠10g、防风10

4、goG6805-1型针灸治疗仪为青岛鑫升实业有限公司生产，湖北中医学院针灸实验中心提供。2方法造模方法以结扎股静脉的方法［3］造模，用％的戊巴比妥按3mg/kg剂量进行耳缘静脉麻醉。麻醉满意后将家兔仰卧固定于兔台上，四肢伸直。所有实验动物均取右侧下肢造模。右侧股根部备皮、消毒，无菌条件下操作，用手指触及腹股沟股动脉搏动处并以此为中心，做2cm纵行切口，切开皮肤、皮下组织，暴露股神经血管束，分离股静脉并进行双重结扎，在两道结扎线间将股静脉剪断，缝合皮肤及皮下组织。术后每天肌注青霉素20万U/只，共7d，以预防感染。分组及处理3

5、2只白兔随机分为正常组、模型组、扶他林组和外治法组，每组8只。正常组不做任何特殊处理。模型组造模成功后正常喂养，自由活动。扶他林组用扶他林乳胶剂在患膝周涂抹均匀，轻揉3~5min。外治法组则用中药熏蒸配合手法弹拨以及电刺激，每次熏蒸30min，手法弹拨20min，以膝关节周围及股后侧及小腿后侧肌肉为主，配合伸膝关节。电刺激采用G6805-1型针灸治疗仪，配用自制电极，主要刺激兔股前侧及小腿后侧肌肉及膝周穴位，引起兔患膝被动屈伸达40°〜50°为宜，主要以屈曲为主。以上两组均造模成功、自由喂养8周后分别开始治疗。治疗4周后处死

6、动物取标本，标本取出后用10%多聚甲醛固定，行石蜡切片。模型组和正常组均在相应时间处死，取标本做石蜡切片。检测方法石蜡切片常规脱蜡，3%的双氧水室温5〜lOmin灭活内源性酶。抗原热修复。滴加5%BSA封闭液，20min(室温下)。加入稀释的bFGF一抗，lh(37°C)。加入生物素标记的羊抗兔二抗，链霉亲合素生物素过氧化酶溶液与DAB液，室温显色，镜下控制反应时间。苏木素复染封片观察。其间每个步骤均用PBS冲洗5min3次。结果判定：在400倍高倍镜下观察细胞内外有无染色，未着色为阴性，浅棕黄色为弱阳性，中等棕黄色为阳性，

7、深棕黄色为强阳性。统计方法实验数据以平均值士标准差（士S）表示，组间差异比较采用q检验，所有数据均采用SPSS统计软件进行分析。3结果正常组免疫组化染色为阴性；模型组仅有部分细胞因子反应阳性，部分为弱阳性，胞浆中有黄褐色的斑块状阳性物质分布，但量较少，大部分细胞无着色，外治法组和扶他林组与正常组相比有所不同，胞浆中阳性物质数量增多，阳性细胞增加。在400倍光镜下每组选取10个典型视野，采用同济医科大学免疫组化实验室丽IAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统进行分析。具体结果见表1。表1各组bFGF平均光度均值的比较（略）

8、注：与外治法组比较冲<，**P<4讨论bFGF最早由牛的脑垂体中提取，是由146个氨基酸组成的活性物质，它对中胚层来源的细胞有明显的促有丝分裂作用［4］。它的生物学功能有以下几个方面：促进新生血管形成；促进软组织损伤修复H足进骨、软骨组织损伤修复。现已证实在人体和动物实验中bFGF关节内注