血管钠肽抑制低氧刺激心成纤维细胞c┐fos的表达

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1、血管钠肽抑制低氧刺激心成纤维细胞c┐fos的表达【关键词】,血管钠肽　　关键词:血管钠肽;低氧;心成纤维细胞;c-fos;Ca2+　　摘要:目的研究血管钠肽（VNP）对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响，并对其机制进行探讨.方法分离纯化乳鼠心成纤维细胞，随机分为4组:对照组、低氧组（20～30mL・L-1）、VNP组（10-8～10-6mol・L-1）和VNP（10-6mol・L-1）+低氧组.以免疫组织化学染色方法观察各组c-Fos的表达情况，采用激光共聚焦方法测定了［Ca

2、2+］i水平.结果①低氧组较对照组可以显著升高Fos样免疫阳性细胞数及染色强度（P<0.05）;②VNP预处理心成纤维细胞可以减弱低氧的作用（P<0.05vs低氧组），但Fos的表达量仍高于对照组（P<0.05）;③对照组［Ca2+］i水平无显著变化，低氧组［Ca2+］i水平显著升高，而VNP能使升高的［Ca2+］i水平较对照组和低氧组显著降低（P<0.05）.结论VNP能减弱低氧对心成纤维细胞生长的刺激作用，其机制可能与Ca2+等信号转导分子及c-fos表达有关.　　Keyofthepre

3、sentculturedneonatalrats.Theculturedcardiacfibroblastslyintofourgroups:Controlgroup，hyoxiagroup（20～30mL・L-1），VNPgroup（10-8～10-6mol・L-1）andVNP（10-6mol・L-1）+hypoxiagroup.Thec-Fosexpres-sionofcardiacfibroblastseasuredbythemeansofim-munocytoch

4、emistry，［Ca2+］iconcentrationeasuredbythemeansofinteractivelasercytometer.Thestudiesper-formedeangreyofcardiacfi-broblasts（P<0.05vscontrolgroup），VNPdecreasedthepositivecells（P<0.05vscontrolgroup）anddecreasedthelevelof［Ca2+］iinVNP+hypoxiagroup.Thesefinding

5、sindi-catethatVNPcanattenuatehypoxia-inducedexpressionofc-fosgeneincardiacfibroblastsa公司，c-Fos抗体购于SantaCruz公司，ABC试剂盒购于博士德公司，LE-ICAO500MC图像分析仪购于德国Leica公司.　　1.2方法　　1.2.1主要药物配制VNP:用生理盐水配成10-3mol・L-1的原液，4℃保存，实验前用DMEM培养基稀释成工作液.DMEM培养基:按说明书配置，用0.1mol・L

6、-1的盐酸调pH至7.2～7.4，4℃保存备用.小牛血清:56℃灭活30min，-20℃保存.胰蛋白酶:用生理盐水配成2.5g・L-1的溶液，4℃保存备用.EDTA:用生理盐水配成0.4g・L-1的溶液，4℃保存备用.胶原酶:用生理盐水配成1.5g・L-1的溶液，4℃保存备用.　　1.2.2心成纤维细胞培养无菌条件下取出乳鼠的心脏，剪碎，以1.25g・L-1胰蛋白酶及0.75g・L-1的胶原酶消化成单细胞悬液，离心（1000r・mi

7、n-1，5min），用含0.1mmol・L-1BrdU及100mL・L-1灭活小牛血清的DMEM培养基重新悬浮，贴壁90min后将悬浮细胞吸弃，加入含100mL・L-1灭活小牛血清的DMEM培养基传代至2～4代时，将心成纤维细胞以5×107L-1接种于24孔培养板（预置10mm×10mm的盖玻片，用于免疫组化染色）或100mL的玻璃培养瓶（用于传代），或以1×107L-1，每皿0.3mL接种于培养皿之后，移入37℃，50mL・L-1CO2培养箱中培养.若细胞贴

8、壁并已伸展但未汇合（sub-confluent），用台盼蓝拒染法检查活细胞数大于95%，继续以后实验.　　1.2.3细胞低氧培养方法将接种于培养瓶或培养板的细胞放置于一体积约7L的真空干燥瓶中，通入950mL・L-1N2和50mL・L-1CO2的混合气体，以2L・min-1，通气12min，使真空干燥瓶中气体浓度达到