抗人肝癌免疫毫微粒的制备及体外免疫学性质的

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1、抗人肝癌免疫毫微粒的制备及体外免疫学性质的摘要目的：构建人肝癌特异的免疫毫微粒，探讨免疫毫微粒体外对靶细胞的特异性结合特性及杀伤活性。方法：采用异型双功能交联剂SPDP将人肝癌单抗HAb18与载米托蒽醌的白蛋白毫微粒化学偶联，构建人肝癌特异的免疫毫微粒;采用玻片凝集试验，免疫荧光法及荧光染色阻断法，花环形成实验及花环形成阻断实验，扫描电镜，3H-TdR掺入试验证明抗体与载药毫微粒偶联及免疫毫微粒能特异性结合并杀伤靶细胞SMMC-7721人肝癌株。结果：HAb18抗体已偶联到载药毫微粒上;免疫毫微粒能良好地与靶细胞特异性结合，对靶细胞具有剂量依赖性、选择性杀伤作用。结论：SPDP偶联方法能

2、用于构建免疫毫微粒;人肝癌特异免疫毫微粒体外能特异性结合并杀伤人肝癌细胞株。关键词毫微粒单克隆抗体人肝癌米托蒽醌中国图书分类号R392.2R730.61Preparationandimmunologicalcharacterizationofmitoxantrone-loadedimmuno-nanoparticlesagainsthumanhepatomaLIUXiao-BoCAIMei-Ying(DepartmentofImmunology,edicalSciences,Chengdu610041)AbstractObjective：Toconstructhumanhepatoma-

3、specificimmunonanoparticlesandobserveinvitrobindingandkillingoftargetcellsbytheimmunonanoparticles.Methods:HeterobifunctionalcrosslinkerSPDPanhepatoma)itoxantrone-loadedbovineserumalbuminnanoparticles(DHAQ-BSA-NP).Alotofinvitroexperiments,suchasslideagglutinationtest,immunofluorescentassay,immuno

4、fluorescentblockingtest,rossetformationtest,rossetformationblockingtestandscanningelectronmicroscopyetc,couplingofantibodiestonanoparticlesandspecificbindingofimmunonanoparticlesmunonanoparticlestotargetcells.Results:McAbHAb18munonanoparticlescouldbindspecificallytohumanhepatomaSMMC-7721cellsande

5、xertselectivekillingeffectsonthetargetcellsethodforconstructingimmunonanoparticles.Humanhepatoma-specific-immunonanoparticleshavecapacityofinvitroselectivecoatingandkillinghumanhepatomacellline.Keyanhepatoma将化疗药物吸附、包裹或夹嵌在白蛋白等生物可降解材料中制成毫微粒(Nanoparticles，NP)，应用于肿瘤治疗是目前药剂学中研究热点[1，2]。毫微粒具有载药量大、缓释药物、药

6、物无需化学偶联而以游离形式被包封等多重优点，此外它具有靶向给药特性，即能将药物选择性浓集于病变部位，而不分布或少分布在其它正常部位[1，3]。然而毫微粒的这种靶向给药是器官被动靶向，无主动靶向结合癌细胞作用，因此毫微粒释药杀伤癌细胞同时，不可避免对正常组织造成损伤[4]。将肿瘤特异性抗体吸附或交联到载药毫微粒上，制备抗体导向的毫微粒即免疫毫微粒(Immunonanoparticles)，将具有载药量大、缓释药物、主动靶向性抗癌作用等多种特性，是一种新型的肿瘤导向治疗制剂[4-6]。我们将抗人肝癌单克隆抗体HAb18与载米托蒽醌(Mitoxantrone,DHAQ)的牛血清白蛋白毫微粒(D

7、HAQ-BSA-NP)共价交联，构建了人肝癌特异的免疫毫微粒(HAb18-DHAQ-BSA-NP)。本文报道了此免疫毫微粒的制备、体外免疫学结合特性及其选择性抗瘤作用。1材料与方法1.1DHAQ-BSA-NP冻干品本校药学院张志荣教授惠赠，批号981216，4℃保存备用。1.2抗体抗人肝癌单克隆抗体HAb18由第四军医大学病理教研室陈志南教授惠赠。抗人SIgA单抗4E3纯品由本室自制，本研究中用作对照抗体。免抗小鼠IgG抗血清，FI