抗肝癌米托蒽醌免疫毫微粒的体外抗癌活性研究

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1、第14卷第2期同　位　素Vol.14No.22001年5月JournalofIsotopesMay2001抗肝癌米托蒽醌免疫毫微粒的体外抗癌活性研究12331李云春,王仲琼,蔡美英,刘晓波,匡安仁(11四川大学华西医院核医学科,四川成都　610041;21四川大学华西医院检验科,四川成都　610041;31四川大学华西医学中心基础医学院免疫室,四川成都　610041)摘要:采用花环形成及花环形成阻断实验和免疫荧光染色及其阻断实验研究抗肝癌米托蒽醌免疫3毫微粒(HAb182DHAQ2BSA2NP)体外靶向人肝癌细胞的特性,并利用H2TdR掺入法

2、研究其选择性靶向杀伤人肝癌细胞的作用。结果显示,HAb182DHAQ2BSA2NP能有效地特异性靶向结合人肝癌细胞,且对人肝癌细胞具有特异性杀伤作用,这种杀伤作用的特异性由人肝癌单克隆抗体HAb18决定。关键词:米托蒽醌;免疫毫微粒,抗肝癌;体外,抗癌活性中图分类号:R73517文献标识码:A文章编号:100027512(2001)0220071205以抗体为导向载体实现化疗等杀伤性药物选择性杀伤癌细胞是目前研究包括肝癌在内的[1]所有肿瘤导向治疗药物的一个方向,且已具有初步的临床疗效。但仍存在着载药量低,“弹[2]头”杀伤力不强,抗体的动物

3、源性如鼠源性等缺陷。免疫毫微粒是粒径为纳米级的胶态固体颗粒,其载药量较大,有缓释药物性,且能通过抗体特异性导向实现对癌细胞主动选择性结合[3～6]杀伤,不损伤正常组织或减小了对其损伤。文献[7]制备了抗肝癌米托蒽醌(DHAQ)免疫毫微粒(HAb182DHAQ2BSA2NP),其表面抗人肝癌单克隆抗体HAb18的量为315mgög。本工作拟对其体外靶向人肝癌细胞的结合特性和杀伤癌细胞的活性进行研究。1　实验材料111　主要试剂3人肝癌细胞SMMC27721:四川大学华西医学中心基础医学院免疫室提供;H2TdR:中国科学院上海原子核研究所生产;1

4、640培养液:美国Gibcobrl公司生产;人胃癌细胞株SGC27901:四川大学华西医学中心基础医学院生化室提供;抗人肝癌单克隆抗体HAb18:第四军医大学制备;荧光标记羊抗小鼠免疫球蛋白(IgG2FITC):华美生物工程公司生产;磷酸缓冲液(PBS):自制,浓度为0105molöL,pH715;DHAQ牛血清白蛋白(BSA)毫微粒(NP)DHAQ2收稿日期:2000208228;修回日期:2000212217基金项目:卫生部科研基金资助项目(98212225)作者简介:李云春(1966～),男(汉族),四川省射洪人,副研究员,核医学专业7

5、2同　位　素　　　　　　　　　　　　　　　　　第14卷　BSA2NP:自制;HAb182DHAQ2BSA2NP:自制;对照免疫毫微粒4E32DHAQ2BSA2NP(4E3为抗人膀胱癌单克隆抗体):自制。112　主要仪器PM2CBAD型倒置显微镜和荧光显微镜:日本Olympus公司生产;FH463A自动定标器:北京核仪器厂生产;H2600IV型电子显微镜:Hitachi公司生产。2　实验方法211HAb18-DHAQ-BSA-NP的体外靶向结合人肝癌细胞的研究[8]21111花环形成及花环形成阻断实验　①将生长良好的靶细胞SMMC27721和对

6、照细胞SGC27901经5mL、20%的胰蛋白酶消化2h后离心,用含5%小牛血清的PBS洗涤沉淀后将5沉淀配制成2×10ömL细胞悬液,加入免疫毫微粒(HAb182DHAQ2BSA2NP或4E32DHAQ2BSA2NP)或毫微粒(DHAQ2BSA2NP),室温振荡60min,离心,沉淀用PBS洗涤3次后于光镜下观察细胞和微粒的结合情况,即花环形成情况。以结合4个以上微粒的细胞为阳性,以100个细胞中的阳性细胞数为花环形成率。②取靶细胞SMMC27721悬液与不同浓度HAb18抗体混合,离心,用PBS洗涤沉淀3次,在沉淀中加入免疫毫微粒,室温振

7、荡60min,光镜下观察其花环形成情况。用同样的方法计算花环形成率。21112　免疫荧光染色及其阻断实验　①取HAb182DHAQ2BSA2NP,加入等量羊抗小鼠IgG2FITC,4℃作用30min,离心,用PBS洗涤沉淀3次,置沉淀于荧光显微镜下观察其免疫荧光染色效果。用同样的方法对DHAQ2BSA2NP进行实验。②取生长良好的靶细胞SMMC27721或对照细胞SGC27901悬液加入等量FITC2HAb182DHAQ2BSA2NP,4℃作用30min,离心,用含5%小牛血清的PBS洗涤沉淀3次,将沉淀置于荧光显微镜下,观察荧光标记免疫毫微

8、粒与细胞的结合情况。③取靶细胞悬液与不同浓度HAb18混合,4℃作用30min,离心,用PBS洗涤沉淀3次,加入FITC2HAb182DHAQ2BSA2NP,4℃作