ck2参与调控肺癌细胞中tgf-β通路的研究

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1、CK2参与调控肺癌细胞中TGF-3通路的研宄(1辽宁省大连市第五人民医院胸外二科辽宁大连116021)(2广东省中山大学肿瘤防治中心胸外科510060)(3美国加州大学旧金山海伦迪勒癌症中心胸外科94143)【摘要】蛋白激酶CK2在多种人类恶性肿瘤细胞中处于过表达状态。TGF-β信号通路在肺癌中失调控，并被证实与肿瘤转移及患者不良预后密切相关。木研究表明，在人类非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中，CK2正性调控TGF-β信号通路。首先我们证实，TGF-β信号通路转录因子Smad2在原发肺癌组织标木中

2、表达升高；然后我们发现，在NSCLC细胞系中，抑制CK2可以下调Smad2表达及水平及转录活性，继而下调多种TGF-β信号通路靶基因(TGFβlll,GDF11,KLF10)表达水平。在划痕实验中，抑制CK2α后，NSCLC细胞表现出更低的侵袭生长潜能；接下来，我们证实Smad2表达及转录活性均下调，通路靶基因表达水平下降：进一步的蛋白降解实验表明，抑制CK2&alPha;促进Smad2蛋白降解。我们首次报道，在NSCLC中，CK2正性调控TGF-β信号通路，抑制CK2可下调TGF-&

3、beta;信号通路活性。【关键词】CK2α；TGF-β信号通路;CX-4945；Smad2；非小细胞肺癌(NSCLC)【中图分类号】R73-3【文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2016)27-0066-031.研究背景1.1CK2酪蛋白激酶2(caseinkinase2)是一类能催化肽链中邻近酸性氨基酸残基的丝氨酸/苏氨酸磷酸化的酶，具有广谱底物特异性，在细胞的生存、生长、转化、增殖和肿瘤的发牛.中都发挥了重要的作用，一旦失调，细胞无限增殖，产生癌变1。在包括肺癌的多种恶性肿瘤中，过表达的C

4、K2α可以作为提示预后不良的因素2。研究表明，CK2调控肿瘤细胞内多种信号传导，如PI3K，NFkB,Wnt3。近年来，己有多种针对CK2的抑制物被开发，其中CX-4945（特异性小分子抑制剂）和CIGB-300（多肽类抑制物），已进入一期临床试验，其疗效及安全性也初步被证实。1.1TGF-β信号通路与肿瘤发生发展转化生长因子-β（transforminggrouthfactor-β,TGF-β）在多种生物学行为（如细胞增殖、癌症转移）中发挥着重要的作用。TGF-β

5、l是0前研宄得最深入活跃的一型，通过一系列激活过程，TGF-βl与相应受体结合进行信号传导，通过下游的信号调节蛋闩Smad2和Smad3对靶基因进行调节4。在肿瘤发生的早期阶段，TGF-β信号抑制上皮细胞生长，在癌症进展期，TGF-β失去对细胞生长的抑制作用5。1.2CK2与TGF-β在人类恶性肿瘤中，CK2通过磷酸化机制参与多种信号通路的调控。本项研宄探讨人类肺癌细胞中CK2与TGF-β通路的关系，并对其可能的调控机制进行研究，寻找更冇效地肿瘤治疗靶点，并为CK2靶点药物的应

6、用提供新的理论依据。2.研究方法2.1细胞培养、小分子处理、免疫组织化学人类非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中生长。以不同浓度的CK2小分子抑制剂处理细胞，培养48小吋后收集细胞。标本来自于大连市第五人民医院原发肺癌患者的手术切除。应用Anti-Smad2和anti-phosphorylatedSmad2抗体对标本进行炎色，使用如下评分系统：不炎色；+、弱染色；++,中染色；+++、强染色。2.2siRNA、质粒DNA转染以CK2αsiRNA和对照siRNA分别处理细胞，

7、使用LipofectamineRNAiMAX进行转染;质粒选用pcDNA3.1-CK2α和controlpcDNA3.1-LacZ,转染48小时后收集细胞进行RNA及蛋白分析。2.3RNA提取、实时定量荧光PCR、WesternBlot分析收集RNA,定量检测基因包括Smad2、TGFβlll、GDF11、KLF10、Smad7。BCA法测定蛋白含量，一抗选用anti-Smad2和anti-GAPDH。经二抗处理后，蛋白检测应用ECL印记分析系统进行发光分析。2.4荧光素酶报告基因分析将野生型Smad和突

8、变型Smad质粒转染至细胞内，共转染管家基因RenillaluciferasepRL-TK质粒。24小吋后进行焚光检测。2.5统计分析数据分析使用三次独立分析数据的均数&plusmri;标准差(SD),组间差采用Student’st-检验，以P<0.05表示