miR-15a-16靶向调控TGF-β信号通路影响前列腺癌LNCaP细胞侵袭的机制研究

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1、分类号：R737.25单位代码：10159密级：公开学号：200810245博士学位论文中文题目：miR-15a/16靶向调控TGF-β信号通路影响前列腺癌LNCaP细胞侵袭的机制研究miR-15a/16regulatesinvasionofprostatecancerLNCaPcells英文题目：throughtargetingTGF-βsignalingpathway论文作者：金玮指导教师：吴斌教授学科专业：外科学完成时间：2018年10月1中国医科大学博士学位论文miR-15a/16靶向调控TGF-β信号通路

2、影响前列腺癌LNCaP细胞侵袭的机制研究miR-15a/16regulatesinvasionofprostatecancerLNCaPcellsthroughtargetingTGF-βsignalingpathway论文作者金玮指导教师吴斌教授申请学位医学博士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科外科学研究方向泌尿外科论文课题起止时间2009年3月—2018年10月论文完成时间2018年10月中国医科大学（辽宁）2018年10月1中国医科大学博士学位论文I中国医科大学博士学位论文摘要目的：前列腺癌是男性泌

3、尿生殖系统常见的恶性肿瘤，发病率在我国居于泌尿系肿瘤第三位。近年来前列腺癌发病率迅速增长，且发病年龄日趋年轻化。侵袭转移是恶性肿瘤的重要生物学特征之一,也是影响肿瘤预后的重要因素。仅仅以其最常见转移方式——骨转移为例，至少有65%-75%的前列腺癌患者发生骨转移，而在死于前列腺癌的患者中，转移率高达85%-100%。明确前列腺癌转移过程中的分子生物学机制，将为前列腺癌的预诊断治疗提供理论基础。微小RNA（microRNA，miRNA）是转录后调控的重要调节分子。miR-15a/16簇定位于人类染色体13q14.2，

4、既往研究表明该簇在肿瘤发生进展过程中表现出抑癌基因的特性。在前列腺癌中，13q14.2微缺失导致miR-15a/16簇杂合性丢失，尤其在转移性前列腺癌中发生率较高，提示miR-15a/miR-16簇缺失可能与前列腺癌的转移密切相关。TGF-β信号通路是研究前列腺癌转移机制的热点之一，典型通路是TGF-β/Smads信号通路。除此之外，TGF-β超家族中TGF-β、BMP及Activin等信号分子均在肿瘤转移过程中扮演重要的角色，可能是潜在的miR-15a/16调控靶基因。目前，miR-15a/16是否通过调节TGF

5、-β信号通路相关信号分子调控前列腺癌转移尚无明确解释。本研究拟通过生物信息学预测、报告基因实验、real-timePCR和Westernblot等方法证实miR-15a/16通过靶向调节TGF-β信号通路相关分子调控前列腺癌转移的机制。研究方法：实验材料：1、人前列腺癌细胞系LNCaP、人胚肾HEK293细胞及培养相关试剂2、基因克隆相关分子生物学试剂3、荧光素酶报告基因检测相关分子生物学试剂4、Real-timePCR及Westernblot相关试剂5、Transwell小室及相关试剂实验方法：LNCaP、HEK

6、293细胞培养、基因瞬时转染、Real-timePCR检测II中国医科大学博士学位论文mRNA表达、Westernblot检测蛋白表达、检测荧光素酶报告基因、Transwell小室检测细胞侵袭力、生物信息学预测、统计学分析。结果：1．生物信息学预测结果显示，Smad3、Smad5、BMPR1A、ACVR2A、ACVR2B编码基因3′-UTR上均潜在miR15a/16的结合位点；2．荧光素酶报告基因检测结果显示：过表达miR-15a/16明显抑制Smad3、ACVR2A3′-UTR报告载体荧光素酶活性，转染抑制剂后可

7、使其活性上升；3．WesternBlot和Real-timePCR结果显示，过表达miR-15a/16明显抑制LNCaP细胞内源性Smad3、ACVR2A蛋白水平，但Smad3、ACVR2AmRNA水平没有明显改变；此外，转染miR-15a/16组磷酸化smad3水平表达下调，MMP2蛋白表达下调，EMT诱导因子Snail1、Twist1的mRNA表达下调；4．Transwell小室法检测结果显示，miR-15a/16过表达抑制LNCaP细胞的侵袭。结论：1、miR-15a/16通过与Smad3、ACVR2A3′-

8、UTR序列靶向结合，在转录后水平抑制基因的表达。2、miR-15a/16通过Activin/smad信号通路调节前列腺癌细胞转移。关键词：miR-15a/16；TGF-β信号通路；前列腺癌；转移；III中国医科大学博士学位论文AbstractObjective：Prostatecancerisoneofthemostcommonmalignanttumors