筛选治疗湿性amd的小分子化合物及其相关生物学机制的研究

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1、电子科技大学UNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINA硕士学位论文MASTERTHESIS论文题目筛选治疗湿性AMD的小分子化合物及其相关生物学机制的研究学科专业生物化学与分子生物学学号201521210111作者姓名蒋维维指导教师DeanYawLi教授分类号密级注1UDC学位论文筛选治疗湿性AMD的小分子化合物及其相关生物学机制的研究蒋维维指导教师DeanYawLi教授电子科技大学成都童宗中教授电子科技大学成都申请学位级别硕士学科专业生物化学与分子生物学提交论文日期2018年4月论文答辩日期2018年5月学位授予单位和日期电子科

2、技大学，2018年6月答辩委员会主席王涛评阅人石毅教授，王子艳副教授注1：注明《国际十进分类法UDC》的类号。ScreeningofsmallmolecularcompoundsforwetAMDtreatmentandresearchingofrelatedbiologicalmechanismsAMaster’sDissertationSubmittedtoUniversityofElectronicScienceandTechnologyofChinaDiscipline:BiochemistryandMolecularBiologyAuthor:WeiweiJiangSuper

3、visor:Prof.DeanYawLiSchool:SchoolofMedicine摘要摘要老年性黄斑变性（Age-relatedmaculardegeneration，AMD）主要分为干性和湿性，湿性AMD是由于血管稳定性降低导致的病变，致使眼睛视力降低和失明。目前，干性AMD还没有很好的治疗用药，湿性AMD的临床治疗主要是通过VEGF抗体阻断VEGF的信号通路，但疗效不好。其主要原因是湿性AMD的发病机制不详，除VEGF信号通路外，还有其它信号通路参与调控血管的稳定性。因此，迫切需要新的湿性AMD治疗药物。血管壁是血液和血管外组织的屏障，其最内层是由血管内皮细胞组成的具有选择性通

4、透性的单层细胞屏障，血管内外的物质交换都需要通过这层屏障。血管内皮细胞间是通过细胞表面的膜蛋白VE-cadherin形成紧密连接，当VE-cadherin通过内吞作用进入细胞内，细胞膜上分布减少，会削弱血管内皮间的连接，导致血管的稳定性降低。本课题的目标是（1）建立高通量药物筛选平台；（2）筛选已知生物活性的化合物库，发现增强视网膜血管稳定性、可用于治疗湿性AMD的小分子化合物。筛选分为两级：基于电动细胞基质传感实时细胞分析仪（RTCA）的初级筛选和Transwellpermeability的二级筛选，筛选能够抑制炎症反应细胞因子IL-1β诱导人视网膜血管内皮细胞（HRMVEC）单层通

5、透性增高的化合物。对筛选到的阳性化合物进行结构和活性关系确定，为化合物的结构优化打下基础。通过体外细胞生物学实验，研究化合物增强血管稳定性作用的生物学机制。并用动物模型，检验化合物在体内对视网膜血管病变疾病的疗效。筛选到两个化合物可以增强血管稳定性，这两个化合物可以抑制IL-1β诱导VE-cadherin的内吞，抑制IL-1β激活Arf6。表明化合物通过调控Arf6活化和其对VE-cadherin内吞作用，抑制膜上VE-cadherin的减少，保护血管内皮细胞间连接的机制来增强血管稳定性。动物体内实验表明化合物能够增强视网膜血管稳定性，降低视网膜组织中EvansBlue的渗漏量，结果表

6、明：（1）我们的筛选平台可以用于增强血管稳定性的药物筛选；（2）筛选出的化合物有可能为治疗湿性AMD的新的用药。关键词：老年性黄斑变性，药物筛选，小分子化合物，血管，血管内皮细胞IAbstractAbstractAge-relatedMacularDegeneration(AMD)isadiseasecausedbymultiplereasonsandresultinlosingofcentralvision.DryAMDandWetAMDarethetwomaintypesofadvancedstageAMD.ThereisnotreatmentfordryAMDavailabley

7、et.VEGFantibodiesturntobethegoldstandardtreatmentofwetAMD.However,theexistenceofanti-VEGFtreatmentnon-respondersuggestthatothersignalingpathwaysareinvolvedinthepathogenesisofwetAMDtoo.Therefore,non-VEGFrelatedtreatmentisinur