小分子化合物RepSox对破骨细胞相关性骨代谢的影响机制研究

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1、分类号：R6（可为空）单位代码：10343学号：151002447（隐去）硕士学位论文论文题目:小分子化合物RepSox对破骨细胞相关性骨代谢的影响机制研究研究生姓名：梅良伟学科专业：外科学（骨外）类型：学术型指导教师：何登伟二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目:小分子化合物RepSox对破骨细胞相关性骨代谢的影响机制研究答辩委员会主席：朱麟勇教授华东理工大学答辩委员会成员：杨雷教授温州医科大学附属第二医院钱宇教授绍兴市人民医院论文答辩日期：2018年5月27日2目录一、论文………………………

2、………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………………1Abstract………………………………………………………………………4缩略词表………………………………………………………………………8前言………………………………………………………………………9材料与方法………………………………………………………………………10结果………………………………………………………………………25分析与讨论………………………………………………………………………37参考文献……

3、…………………………………………………………………39二、附录………………………………………………………………………43三、致谢………………………………………………………………………44四、综述………………………………………………………………………45参考文献………………………………………………………………………56五、独创性声明………………………………………………………………………62……温州医科大学硕士学位论文小分子化合物RepSox对破骨细胞相关性骨代谢的影响机制研究中文摘要研究背景与目的骨质疏松

4、症（osteoporosis，OP）是一种由于骨代谢功能紊乱而导致的疾病，其发病特征为骨密度降低和骨微结构破坏，从而导致骨脆性增加进而易发生骨折。尽管已有研究证明双膦酸盐类(Bisphosphonate)、降钙素(Calcitonin)、雌激素(Estrogen)和选择性雌激素受体调节剂(SERMs)等传统药物对骨质疏松的治疗具有一定的积极作用，但在临床实际应用中仍存在骨骼肌肉痛、下颌骨坏死(MRONJ)等药物相关并发症。破骨细胞是目前已知的人体内唯一行使骨吸收功能的多核巨细胞，当其数量增加或功能增强时

5、可导致骨量过度丢失进而引起骨质疏松症，深入进行抗破骨细胞相关性研究是研发新型抗骨质疏松药物的关键。小分子化合物RepSox能够有效抑制TGFβR-1/ALK5的磷酸化，已有文献报道其在抗纤维化、胚胎和白血病靶向治疗中具有良好作用，但其对破骨细胞相关性骨代谢的作用尚不清楚。本研究的目的是探究RepSox对体外破骨细胞增殖、分化、骨吸收功能及体内抗骨丢失的影响，并探讨其作用机制，为临床转化应用提供充分的细胞生理学和动物实验学研究基础。材料与方法1.临床骨组织标本检测：在临床工作中分别收集五名确诊为骨关节炎和

6、骨质疏松症患者的骨组织标本，应用实时荧光定量PCR（QT-PCR）研究TGFβRⅠmRNA的表达量在两者之中的差异；2.动物实验：本研究选用卵巢去势小鼠模型模拟人类骨质疏松症。根据给药浓度的不同，将实验小鼠随机分为四组：Sham组、Vehicle组、Low组和High组。造模一周后，不同组别的小鼠腹腔注射PBS或RepSox，每周注射两次，连续注射四周。试验结束后分离并收集小鼠的腰椎和股骨放入4%多聚甲醛固定，然后应用micro-CT拍片、H&E染色、TRAP染色等方法研究RepSox对骨质疏松的抑制作

7、用。3.细胞实验：（1）应用CCK-8法研究不同浓度RepSox对小鼠骨髓巨噬细胞系BMMs增殖的影响。RepSox溶液倍比稀释，浓度梯度分别为0µM、0.00625µM、0.0125µM、1温州医科大学硕士学位论文0.025µM、0.05µM、0.1µM、0.2µM、0.4µM、0.8µM和1.6µM。（2）探究不同浓度RepSox对破骨细胞分化的影响，浓度分别为0nM、125nM、250nM和500nM。（3）探究不同浓度RepSox对破骨细胞骨吸收功能的影响，浓度分别为0nM、125nM、250n

8、M和500nM。（4）应用QT-PCR研究同一浓度不同时间及不同浓度RepSox对破骨细胞形成相关标志性基因表达的影响。（5）应用蛋白印迹法（WB）研究RepSox对破骨细胞生成重要通路相关蛋白表达的影响。（6）应用CCK-8法研究不同浓度RepSox对成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖的影响。RepSox溶液倍比稀释，浓度梯度分别为0nM、7.8125nM、15.625nM、31.25nM、62.5nM、125nM、250nM、500nM