体外破骨细胞骨吸收模型的建立及骨吸收上清液对前成骨细胞功能的影响及其机制研究

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1、浙江大学硕士学位论文体外破骨细胞骨吸收模型的建立及骨吸收上清液对前成骨细胞功能的影响及其机制研究姓名：王凯申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：陈莉丽201203浙江大学硕士学位论文中文摘要体外破骨细胞骨吸收模型的建立及骨吸收上清液对前成骨细胞功能的影响及其机制研究浙江大学医学部口腔医学系2009级硕士研究生王凯导师陈莉丽中文摘要目的：研究破骨细胞骨吸收活动中的分泌产物对成骨细胞增殖、分化及成骨功能的影响，以了解活化的破骨细胞在体外对成骨细胞的影响；并确定其发生作用的信号通路，以期为治疗牙槽骨吸收提供新的治疗靶点。方法：诱导小鼠RAw264．7细胞为破骨细胞，

2、用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrateresistamacidphospha啪e，TRAP)染色和破骨细胞特异性基因检测鉴定。破骨细胞与牛骨磨片共培养，甲苯胺蓝染色。收集共培养上清液作用于小鼠MC3T3．E1细胞，用甲基噻唑基四唑法(metllylt11iazolyltetrazoli姗，MTT)法、酶联免疫吸附法、茜素红染色及反转录聚合酶链反应检测细胞的增殖、骨钙素水平、矿化及成骨特征基因的表达；共培养上清液及P13K特异性抑制剂作用于小鼠MC3T3．E1细胞后，蛋白免疫印迹实验(westem_bolt)检测相关信号蛋白的表达。结果：TRAP染色、破骨细胞特异性基因

3、检测及甲苯胺蓝染色，表明RAw264。7细胞可分化为具骨吸收能力的破骨细胞。破骨细胞骨吸收上清液作用，MC3T3．E1细胞增殖受抑制(OD值在O．062士O．004和O．405士O．033之间，P

4、KT表达显著增加(P<0．05)。特TTT浙江大学硕士学位论文中文摘要异性抑制剂LY294002阻断后，P．P85及P．AKT均出现了剂量依赖性的降低，且都低于上清处理组(P<0．05)。结论：RAw264．7破骨细胞骨吸收上清液具有抑制成骨样细胞增殖，促进分化和钙化成骨的作用。破骨细胞骨吸收上清促进小鼠MC3T3．E1细胞的分化作用是通过P13K信号通路产生的。关键词：破骨细胞；成骨细胞；骨钙素；茜素红染色；TRAP染色；信号通路；P13K／AKTIV浙江大学硕士学位论文英文摘要AnosteoclastboneresorptionmodelestablishedIn

5、VitroandtheeffbctofosteoclastboneresorptionsupernatantsontheosteogenicactiVityofmouseMC3T3一E1cellsandrelatedsignaIingpathwayDepaltmentofStomat0109y，MedicalC011ege，ZhejiangUniVersityGraduateSupervisorwangkaichenliliAbstractobjectiVe：TbinVestigatetheef!I’ectofosteoclaStboneresorptionsupem

6、a：tams0ntheosteogenicactiV时ofmouseMC3T3一E1cellline，Combillingmal(essurebyWhichsi龋alingp砒lWaymatitriseafhctiontofindanewther印ytargetforalVeolarbonereso印tion．Methods：MouseRAW264．7ceUlinew2LsillducedtoosteoclaStwhich、vaSidemifiedwitllT￡Inrateresistamacidphosphatase(TRAP)sta：iIlingaIldosteo

7、clastspecificgenedetection．Thedi旋rentiated黜州264．7oSteoclaStwasco—culturedw油bovinemillingboneSpecimenf01lo、vedbyToluidinebluestaining．ThenmouseMC3T3-E1cellw嬲cultured埘t11supemat孤t舶m恤osteocl缄boneabsorbentmodel．Methylthiazolylte仃azolium(MTT)metllod，A1izarinRedSstaining，ELISAdetecti