冲击波对体外诱导培养的破骨细胞形成及骨吸收作用的影响

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1、河北医科大学2811225学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。，：‘-，研究生签名吲导师签二级学院领导盖章：．}∥矿i量。卢歹研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包

2、含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章协／月日．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4骨吸收作用的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25参考文献

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．45中文摘要冲击波对体外诱导培养的破骨细胞形成及骨吸收作用的影响摘要目的：骨质疏松症(Osteoporosis)是一种由于骨形成和骨吸收的负相平衡导致骨骼脆弱，并增加了骨折风险为特征的疾病。骨质疏松症与破骨细胞(osteoclast)数量和骨吸收活性的增强有密切联系。破骨细胞来源于骨髓单核／巨噬细胞系，由破骨细胞前体的融合而来，形成多核巨细胞，是人体生

4、理性骨重建和病理性骨破坏过程中高度特异性的唯一具有骨质吸收功能的多核巨细胞。骨吸收作用是通过破骨细胞的活动完成的，因此，破骨细胞在骨骼的形成和骨量的调节方面起着关键作用。病理条件下，许多骨代谢性疾病(如骨质疏松症)，都是由于骨吸收亢进引起的。因此，对破骨细胞的形成和骨吸收作用的研究在治疗骨质疏松等骨吸收疾病中具有重要的指导意义。体外冲击波疗法(ExtracorporealShockWaveTherapy，ESWT)是近20年来发展起来的一种由体外震波碎石术衍生来的物理治疗方法，二十世纪90年代初发现冲击波可以治疗骨科的很多疾病．实验研究发现适宜能量的冲

5、击波可以增加成骨细胞的成骨活性，进而促进骨折愈合。但冲击波作为一种能量刺激形式，对破骨细胞的形成及骨吸收活性的影响，目前未见国内外有相关研究。本实验通过将体外冲击波作用于体外诱导培养的破骨细胞，探讨冲击波对破骨细胞形成及骨吸收作用的影响。方法：1．骨髓间充质干细胞的分离及诱导培养密度梯度离心法体外分离骨质疏松症患者骨髓基质干细胞，接种在放有盖玻片和骨片的24孔板中，以l，25．(OH)2D3体外诱导培养，随机分为2组，冲击波干预组和空白对照组。2．冲击波对体外诱导培养的破骨细胞形成的影响冲击波干预组在体外诱导培养的第4天给予0．08mJ／mm2，100

6、次的冲击波作用。两组分别在体外诱导培养的第3，6，9，12天，提取破骨细胞，进行TRAP染色，进行破骨细胞形态观察，进行破骨样细胞和破骨细胞计数，RT-PCR技术结合光密度相对值半定量分析不同时间点两组NFATcl中文摘要和C—Fos的基因表达的差异，分析冲击波对体外诱导培养的破骨细胞形成的影响。3．体外冲击波对成熟破骨细胞骨吸收作用的影响在体外诱导培养的第12天给予冲击波干预组0．08mJ／mm2，100次的冲击波作用。在体外诱导培养的第15天取出骨片，l％甲苯胺蓝染色后光镜下进行骨陷窝计数，扫描电镜观察破骨细胞形成的骨吸收陷窝，用Imageprop

7、lus5．0计算机图像分析系统分析吸收陷窝的面积，反映破骨细胞的骨吸收活性。4．各实验分别重复3．5次，实验数据用x士s表示，所有参数采用SPSS11．0统计软件进行分析。不同时间点冲击波干预组和空白对照组均数比较采用重复测量设计资料的方差分析；2组间破骨细胞骨吸收陷窝的数量和面积之间均数比较采用两独立样本比较的t检验，p<0．05认为差异有统计学意义。结果：1．两组培养板中TRAP+细胞在诱导培养的第3天开始出现，破骨样细胞和破骨细胞计数显示两组差异无统计学意义(P>O．05)。冲击波干预组在细胞培养的第4天给予冲击波干预(O．08mJ／mm2，10

8、0次)后，分别于细胞培养的第6、9、12天进行破骨样细胞和破骨细胞计数，发现：第6天开始，空白