流式细胞术鉴别诊断良恶性胸腔积液

《流式细胞术鉴别诊断良恶性胸腔积液》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、流式细胞术鉴别诊断良恶性胸腔积液[]目的流式细胞术用于鉴别诊断良恶性胸腔积液的临床意义。方法选择在我院进行治疗的胸腔患者20例为研究对象，其中10例为恶性胸腔积液，10例为良性胸腔积液。所有患者均经诊断明确。采用流式细胞术直接免疫标记法检测积液细胞中表达突变型p53细胞的阳性率。结果恶性胸腔积液p53阳性细胞百分率为（91.8±30.6）%，良性胸腔积液p53阳性细胞百分率为（38.5±14.1）%，两组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。恶性胸腔积液p53平均荧光强度（4.98±2.12），良性胸腔积液p53平均荧光强

2、度（0.47±0.10），两组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。p53平均荧光强度与液p53阳性细胞百分率的诊断符合率为90%（18/20），p53阳性细胞百分率与细胞学检测结果的符合率为95.5%，p53平均荧光强度与细胞学检测结果符合率为80.0%（16/20）。结论流式细胞术检测p53阳性细胞率可以用于良恶性胸腔积液的鉴别诊断。　　[关键词]流式细胞术；胸腔积液；p53　　多种胸腔疾病均能导致胸腔积液，其中良恶性胸腔积液的鉴别诊断是临床上的一个难题。虽然说目前的检测手段比较多，但是仍然有一部分患者得不到及时的明确

3、诊断。流式细胞术（Floetry，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术[1]。P53是目前发现的与人类肿瘤密切相关的癌基因之一，因此通过检测p53蛋白可以了解p53突变情况。本文采用流式细胞术对良恶性胸腔积液进行鉴别诊断。现将结果报道如下。　　1资料与方法　　1.1一般资料　　选择在我院进行治疗的胸腔积液患者20例为研究对象，所有患者均经过

4、细胞学或组织学诊断明确。共收集标本20份。其中良性标本和恶性标本各10份。良性胸腔积液包括脓胸4例，结核性胸膜炎3例，其他3例。　　1.2研究方法　　1.2.1细胞培养取出细胞冻存管放入37摄氏度的水浴中，溶化后，酒精消毒瓶口，取出悬液，加入培养液10ml离心，去上清后再重复以上步骤一次。然后加入培养液后转入培养瓶，在37摄氏度5%CO2条件下进行培养，更换培养液，继续培养。每天观察细胞培养情况，符合情况后，弃去培养液，PBS液冲洗一次。加入消化液，当细胞完全从瓶上脱落后，加入培养液停止消化。收集细胞，离心后去上清，加入培养液继续

5、培养。在收集细胞前24小时换1次培养液，然后消化液消化，培养液终止消化，细胞计数，浓度定为5×106个/ml。吸取培养液和消化液后，加入冻存的培养液，制成细胞悬液后置入无菌冻存管，每管1-1.5ml。置入液氮罐中冻存。待测。　　1.2.2流式细胞术胸水200-500ml。加入抗凝剂，分装后，离心去上清。洗涤后再次离心取上清。对红细胞沉淀较少的标本，加入红细胞裂解液，混匀后静置10min，离心去上清。PBS液洗涤细胞2次，离心后去上清。冷存后待测。红细胞沉淀多的标本加入白细胞分离液，PBS液洗涤，混匀后贴壁加入含有白细胞分离液的试管

6、中，离心，中层为白细胞，取中层离心去上清，PBS洗涤1次后离心去上清，冷存后待测。　　1.2.3p53检测采用直接免疫荧光标记法。调整标本细胞混悬浓度为1×106个/ml，分别加入两个待测管，为测试管和对照管，每管50μL。加入固定液混匀。室温下培育15分钟，加入PBS液洗涤后离心去上清，加入穿透液混匀，室温下培育5分钟。测定管加入p53抗体2μL，对照管加入小鼠同型对照，混匀。室温避光培育30min。加入PBS液洗涤后离心，弃上清。后加入PBS液500μl重悬细胞，筛X过滤，检测。采用流式细胞仪测定p53。　　1.3评价指标　　

7、p53平均荧光强度>1.0为阳性，p53阳性细胞百分率>90%为阳性。细胞学检查检测出恶性癌细胞为阳性。　　1.4仪器与试剂：使用FACScalibar流式细胞测定仪（美国BD公司生产）与配套的荧光免疫试剂。　　1.5统计学方法　　采用SPSS12.0统计学方法进行数据处理。计量资料采用均数±标准差表示，采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1良、恶性胸腔积液p53阳性细胞百分率比较　　恶性胸腔积液p53阳性细胞百分率为（91.8±30.6）%，良性胸腔积液p53阳性细胞百分率为（38.5

8、±14.1）%，两组比较，差异有统计学意[]目的流式细胞术用于鉴别诊断良恶性胸腔积液的临床意义。方法选择在我院进行治疗的胸腔患者20例为研究对象，其中10例为恶性胸腔积液，10例为良性胸腔积液。所有患者均经诊断明确。采用流式细胞术直接免疫标记法检测