多西紫杉醇联合顺铂在人骨肉瘤化疗中的作用.doc

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1、办公室人员个人思想工作剖析我今年5月份到办公室秘书科工作，研究多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制及在骨肉瘤化疗中的作用。［方法］应用细胞计数、形态学观察、流式细胞术等方法检测和观察分别及联合应用多西紫杉醇和顺铂对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制；建立裸鼠荷人骨肉瘤动物模型，分别及联合应用多西紫杉醇和顺铂对其进行治疗，并设立空白对照。观察瘤体的生长及病理指标。［结果］多西紫杉醇和顺铂分别及联合用药，在一定范围内均对骨肉瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用，并且联合用药组作用明显强于单独用药组，抑制率＞%，凋亡率％。多西紫杉

2、醇和顺铂单独应用均可抑制骨肉瘤瘤体的生长，肿瘤抑制指数分别为％、％;两者联合应用时作用更为明显，肿瘤抑制指数为％。［结论］多西紫杉醇和顺铂联合用药比单独用药对骨肉瘤细胞株增殖抑制作用更强，在骨肉瘤化疗中的作用更强。【关键词】多西紫杉醇；骨肉瘤；裸鼠；凋亡骨肉瘤是最常见的原发性骨恶性肿瘤，好发于青少年。多西紫杉醇是一种新型广谱抗肿瘤药物，可治疗多种晚期癌症如肺癌、胃癌和卵巢癌等〔1、2），但对骨肉瘤的治疗研究文献报道较少。本研究从体内、体外试验两方面研究多西紫杉对人骨肉瘤细胞株H0S-8603的增殖抑制效果及在荷人骨肉瘤裸

3、小鼠化疗中的作用，为多西紫杉醇用于临床骨肉瘤的治疗提供理论依据。1材料与方法细胞及培养条件人骨肉瘤细胞H0S-8603引自中国医学科学院药物研究所，培养于含10°/。的胎牛血清，DMEM培养基中，培养箱37°C含5°%C02，以108/L细胞接种，24h后加多西紫杉醇和顺铂至所需浓度，每24h换液1次，并为相应浓度的药物设立对照组。药物和试剂多西紫杉醇和顺铂均购于齐鲁制药厂，储存于_20°C。噻唑蓝、碘化丙嚏等购于华美生物公司。细胞形态观察细胞经药物处理后，继续孵育24、48h,在倒置相差显微镜下观察并照相。MTT法检测

4、将X106/L细胞接种于96孔培养板，每孔200ul;贴壁后加不同浓度多西紫杉醇，顺铂及联合组处理，每种浓度平行3孔，并设立空白对照组。培养箱内分别培养24、48h，每孔加20ul新配制的5g/LMTT,37°C继续孵育4h，弃上清后加150U1DMS0溶解，振荡至沉淀完全溶解，用全自动荧光酶标仪在490nm波长测定吸光度，计算肿瘤细胞抑制率:肿瘤细胞抑制率=X100%。流式细胞仪分析药物处理24h后，收集细胞X106个，1000r/min离心5min,弃去培养液，PBS1ml洗2次，离心，加入冰预冷的70°/。乙醇固定

5、，4°C过夜；离心弃去固定液，加入PI染液lml，于4°C避光染色3Omin,400目尼龙网过滤，用流式细胞仪检测凋亡率。动物模型的建立将液氮冻存的H0S-8603人体骨肉瘤细胞株复苏，于CO2孵箱扩增培养。取裸鼠20只，4周龄，雌雄不拘，于恒温普通无菌室内超静生物层流架饲养，无菌操作。于每只裸鼠臀部皮下注入等体积细胞悬液，接种的细胞数为1X107个/只，4〜5d后均可形成瘤体。裸鼠分组及用药分组将形成骨肉瘤体的20只裸鼠分为4组，每组5只。A组单纯予顺铂治疗，B组单纯予多西紫杉醇治疗，C组予多西紫杉醇及顺铂联合治疗，D

6、组予等体积生理盐水注射作为空白对照。给药方式及剂量A、B、C、D4组均经鼠尾静脉给药，给药剂量均为：多西紫杉醇20ug/g，顺铂lOug/g，分别在裸鼠成瘤后第1、7、14、21d给药，共4次。疗效观察大体观察每天观察裸鼠的精神状态、饮食及活动灵敏度等一般状况，定期测量裸鼠的体重及肿瘤大小。肿瘤体积按以下公式计算：体积=长乂宽2X；计算肿瘤抑制指数=/V对照组X100%。血涂片治疗结束后自裸鼠眼眶活体取血作血涂片，镜检。骨髓涂片治疗结束后自裸鼠股骨骨髓腔活体取骨髓作骨髓涂片，镜检。重要器官的检查解剖取肝、脾、肺、肾，甲醛

7、固定后作蜡块包埋、切片，行苏木精-伊红染色，镜检。肿瘤的常规病理检查取肿瘤精确测量其长短径，甲醛固定后作蜡块包埋、切片，行苏木精-伊红染色，镜检。统计学处理计量资料用均数土标准差表示，应用SPSS统计软件，采用单因素方差分析及多个样本均数间的两两比较分析。2结果形态学观察在倒置显微镜下，空白组细胞呈多角形、纺锤形，核呈圆形，细胞贴壁生长良好、密集。单用多西紫杉醇及顺铂时细胞多为菱形或不规则形，表现出不同程度的细胞皱缩，边缘毛糙，部分细胞核染色质固缩，聚集于核边，胞浆浓缩，部分可出现由核碎裂形成的凋亡小体，部分圆形细胞脱落

8、而悬浮于培养液中。二者合用时可见细胞凋亡数进一步增加，大量细胞脱落悬浮于培养液中，只剩少数细胞贴壁。以上改变随着药物作用时间的延长而愈趋显著。多西紫杉醇和顺铂对骨肉瘤细胞的生长抑制作用各组药物分别作用24、48h后，对H0S-8603细胞生长抑制作用见表1，表明：细胞存活率与药物浓度呈反比，且有明显的剂量依赖性。随着