多西紫杉醇联合顺铂在人骨肉瘤化疗中的作用论文

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1、多西紫杉醇联合顺铂在人骨肉瘤化疗中的作用论文【摘要】［目的］研究多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制及在骨肉瘤化疗中的作用。［方法］应用细胞计数、形态学观察、流式细胞术等方法检测和观察分别及联合应用多西紫杉醇和顺铂对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制；建立裸鼠荷人骨肉瘤动物模型，分别及联合应用多西紫杉醇和顺铂对其进行治疗，并设立空白对照。观察瘤体的生长及病理指标。［结果］多西紫杉醇和顺铂分别及联合用药，在一定范围内均对骨肉瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用，并且联合用药组作用明显强于单独用药组，抑制率≥59.34%（P＜0.05；），凋亡率

2、18.31%（P＜0.01）。多西紫杉醇和顺铂单独应用均可抑制骨肉瘤瘤体的生长，肿瘤抑制指数分别为84.16%、78.53%；两者联合应用时作用更为明显.freel波长测定吸光度（A），计算肿瘤细胞抑制率：肿瘤细胞抑制率=（1-实验孔测定值/对照孔测定值）×100％。1.5流式细胞仪分析药物处理24h后，收集细胞（1～5）×106个，1000r／min离心5min，弃去培养液，PBS1ml洗2次，离心，加入冰预冷的70％乙醇固定，4℃过夜；离心弃去固定液，加入PI染液1ml，于4℃避光染色30min，400目尼龙网过滤，用流式细胞仪检测凋

3、亡率。1.6动物模型的建立将液氮冻存的HOS-8603人体骨肉瘤细胞株复苏，于CO2孵箱扩增培养。取裸鼠（BALB／c-nu／nu）20只，4周龄，雌雄不拘，于恒温（24～26℃）普通无菌室内超静生物层流架饲养，无菌操作。于每只裸鼠臀部皮下注入等体积细胞悬液，接种的细胞数为1×107个/只，4～5d后均可形成瘤体。1.7裸鼠分组及用药1.7.1分组将形成骨肉瘤体的20只裸鼠分为4组，每组5只。A组单纯予顺铂治疗，B组单纯予多西紫杉醇治疗，C组予多西紫杉醇及顺铂联合治疗，D组予等体积生理盐水注射作为空白对照。1.7.2给药方式及剂量A、B、

4、C、D4组均经鼠尾静脉给药，给药剂量均为：多西紫杉醇20μg／g，顺铂10μg／g,分别在裸鼠成瘤后第1、7、14、21d给药，共4次。1.8疗效观察1.8.1大体观察每天观察裸鼠的精神状态、饮食及活动灵敏度等一般状况，定期测量裸鼠的体重及肿瘤大小。肿瘤体积按以下公式计算：体积（V）=长×宽2×0.2；计算肿瘤抑制指数（I.I）=（V对照组-V实验组）/V对照组×100％。1.8.2血涂片治疗结束后自裸鼠眼眶活体取血作血涂片，镜检。1.8.3骨髓涂片治疗结束后自裸鼠股骨骨髓腔活体取骨髓作骨髓涂片，镜检。1.8.4重要器官的检查解剖取肝、脾

5、、肺、肾，甲醛固定后作蜡块包埋、切片，行苏木精-伊红（HE）染色，镜检。1.8.5肿瘤的常规病理检查取肿瘤精确测量其长短径，甲醛固定后作蜡块包埋、切片，行苏木精-伊红（HE）染色，镜检。1.9统计学处理计量资料用均数±标准差（x-±s）表示，应用SPSS11.5统计软件，采用单因素方差分析及多个样本均数间的两两比较分析。2结果2.1形态学观察在倒置显微镜下，空白组细胞呈多角形、纺锤形，核呈圆形，细胞贴壁生长良好、密集（图1）。单用多西紫杉醇及顺铂时细胞多为菱形或不规则形，表现出不同程度的细胞皱缩，边缘毛糙，部分细胞核染色质固缩，聚集于核边

6、，胞浆浓缩，部分可出现由核碎裂形成的凋亡小体（图2），部分圆形细胞脱落而悬浮于培养液中。二者合用时可见细胞凋亡数进一步增加，大量细胞脱落悬浮于培养液中，只剩少数细胞贴壁（图3）。以上改变随着药物作用时间的延长而愈趋显著。2.2多西紫杉醇和顺铂对骨肉瘤细胞的生长抑制作用各组药物分别作用24、48h后，对HOS-8603细胞生长抑制作用见表1，表明：（1）细胞存活率与药物浓度呈反比，且有明显的剂量依赖性。（2）随着时间的延长，药物的敏感性增加，同一剂量的药物有时间依赖关系。（3）以10μg／ml浓度多西紫杉醇协同8μg／ml浓度顺铂作用24、

7、48h组最为显著，抑制率分别为（69.74±5.66）％、（78.18±7.44）％，与相应浓度单药作用组比较P＜0.01。表1多西紫杉醇（DTX）和顺铂（CDDP）对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用（略）2.3细胞周期及DNA含量的变化流式细胞仪定量检测细胞凋亡比例，结果见表2。2、3、4组分别与1组比较差异均有显著性意义（P＜0.01）；2、3组与4组比较差异有显著性意义（P＜0.01）；3组与2组比较差异亦有显著性意义（P＜0.01）。表2流式细胞术检测药物对骨肉瘤细胞的凋亡率（略）*P＜0.01,vsControlgroup;#P＜0.0

8、1,vsDTX+CDDPgroup。2.4一般情况治疗开始前，各组裸鼠体重变化的差异无显著性，治疗开始后，行多西紫杉醇治疗的A、C2组裸鼠精神状态逐渐萎靡，活动减少，进食饮水量较前减少，体重减