斑马鱼saa蛋白原核表达、抗体制备及菌结合试验

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1、斑马鱼SAA蛋白原核表迖、抗体制备及菌结合试验4.江西中医药大学生物化学教研室，南昌330004)摘要：通过构建斑马鱼(Daniorerio)SAA原核表达载体，在大肠杆菌(E.coli)TB1中诱导表迖并纯化获得了斑马鱼SAA融合蛋白，将纯化的斑马鱼SAA蛋白免疫Balb/c小鼠，制备了特异性多克隆抗血清，并研究了斑马鱼SAA融合蛋白与细菌的结合能力及检测了抗体效价。结果表明，纯化的斑马鱼融合SAA蛋白能够与5种细菌直接结合，血清效价达到1:2000以上。关键词：斑马鱼(Daniorerio);血清淀粉样蛋白

2、A;原核表达;抗体制备；菌结合中图分类号：Q789文献标识码：A文章编号：0439-8114(2015)02-0382-03D0I：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.031ProkaryoticExpression,AntibodyPreparationandBacteriaCombiningofSAAProteininZebrafishQILinl,LIJun2,XIANGZhi-ming3,YUYing-cai4(1.RailwayPoliceCollege,Zhe

3、ngzhou450053，China；2.SchoolofPharmaceutical，LiaochengUniversity,Liaocheng252000，Shandong,China；3.SouthChinaSeaInstituteofOceanology,ChineseAcademyofSciences,Guangzhou510301，China；4.DepartmentofBiochemistryJiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchan

4、g330004，China)Abstract:TheSAAfusionproteininzebrafish(Daniorerio)wasexpressedinE.coliTB1andpurifiedaccordingtotheconstructionofprokaryoticexpressionvector.ThespecificpolyclonalantibodieswereraisedinBalb/cmouseimmunizedwiththepurifiedrecombinantprotein.Thebac

5、teriaconjugationabilityandthevalueofpolyclonalantibodiesweredetected.TheresultsshowedthatthepurifiedSAAproteininzebrafishwasfoundtocombinetogetherwith5bacteria.Thevalueofobtainedantibodieswasupto1:2000.Keywords:zebrafish(Daniorerio)；SAA；prokaryoticexpression

6、；antibodypreparation；bacteriacombining血清样淀粉A(SerumamyloidA,SAA)为高度异质性蛋白［1］，因与一系列疾病相关而成为病理学研究的热点。SAA基因的多态性是淀粉样病变的高危因素，持续高水平SAA是淀粉样病变发生的前提条件［2］。除此之外，SAA与胃癌［3］、直肠癌［4］、胰腺癌［5］、肺癌［6］和绒毛膜癌［7］等恶性肿瘤呈正相关，并将SAA作为癌症临床常规检查的非特异性肿瘤标志物以及手术后康复程度的指标是可行的。人源SAA可以通过NF-kB信号通路诱导细胞

7、间黏附分子1(Intercellularadhesionmolecule1，ICAM-1)的表迖而募集白细胞［8］。本研究中在克隆获得全长斑马鱼(Daniorerio)SAA的基础上［9］，构建融合表达载体，在大肠杆菌TB1中表达斑马鱼SAA并进行纯化，将纯化蛋白进行菌结合试验并免疫Balb/c小鼠制备了特异性多克隆抗体，为后续免疫及肿瘤病理学试验打下基础。1材料与方法1.1试验材料1.1.1载体与菌种原核表迗载体pMal-c2x、大肠杆菌(E.coli)表达宿主菌TB1和AmyloseResin多糖树脂购自N

8、ewEnglandBiolabs公司；pGEM—Tvector贝勾自Promega公司；大肠杆菌DH5a、野生型大肠杆菌K12、副溶血弧(V.parahaemolyticus)、溶澡酸弧菌(V.alginolyticus)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)和表皮葡萄球(S.epidermidis)均为铁道警察学院生化快速鉴别实验室常规保种。1.1.2试剂琼脂糖胶回收试剂盒和小量质粒提