aav-htgfβⅰ体外传染鼠椎间盘细胞再移植的实验研究

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1、青岛人学硕士学位论文AAV-hTGFf3I体外传染鼠椎间盘细胞再移梢的实验研究姓名：李涛申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外科）指导教师：刘勇20110606青岛大学医学院附属医院脊柱外科研究生李涛副主任医师H的：将腺相关病毒AAA榈既俗（AA蜃覷AAA方法:结果:I琍I.11皇笛樽槭质跚昂螅11略低于空白对照组，差异无显著性效率外能实现较强的某因表达。行的。0000000000000000000000,0000000000000000000杞0000000000000000000000000000

2、000瑢0%000000000/00/000000台KO0000000000000000堺=.二畎==二二二二二二二=琍=======w===俐=.—cccccc.cccccccccccccccccccccccccc；ccccccccccc：cccccc；ccccccccc14盘退变性疾病治疗研究的生长W了冇很多种，其屮包括人转化生长WT_成为目前基w治疗领域屮倍受瞩目的载体之一口ir。木实验采用__衿__111大鼠1嗟菏幸°炯11111拦11阒萑1瞪1锟萍加邢薰111虾1°1镉邢薰11111引物1

3、虾1°1镉邢薰111暇111约劣邢薰11第一章材料与方法全自动尚压灭蘭器1111,111111久拦1精密电子天平1111虾L炱揭瞧鞒1恒温磁力搅拌器各型号移液器11111痉（1超纯水设备振荡仪1111111111111111111111均11.11.11。在青岛人学医学院附W医院院动物实验室标准饲养条件不适/1椎间盘作为实验组。将切取的椎叫盘髓核和内层的纤维环组织剪成碎块，于1A下用111挎的胶tt岛人学硕上学位论文00体积分数0㈨’/Q的00培养液0离心00,熏复0巍0赴0且鸾乂钟诘酌婊00如培0

4、0嘌0骸TOOOiO寤0质0.0阁00笫衿滴逝滔赴000嘌0天⑽G第一章材料与方法青岛人学硕士学位论文无血清纪以/训细胞培养液浞合，其终体积能够覆盖细胞的表面为佳。将上述除其对转染效率的影响。先放置X婊肪诚X狐蛋肛W娜撼逑，去除残贸的的从Wi往災光显微镜下W数绿色荧光细胞，计算转染效率。培奍液洗涤#•制成每1鱿赴1/浦赴讥海XTO第一章材料与方法并在原位停留222笛樽2:2/2椎间做用同样的方法注入2阁22人鼠麻醉后侧卧位固记到木板上W•岛大学硕十学位论文图讥人鼠W部消母铺尤卯

5、J阁讥切幵皮肤后，沿

6、竹鉍长肌与腹外斜肌之问的交界处纵行剪开胸腰筋脱后层第一草材料与方法图W将腹外斜肌向腹侧钝性分离用手指向后探摸，摸到椎间盘后，仔细定位。等旧1姆椒虫米导渑谈叨认凳111来表示,计算手术前后11谋浠1%11。术前术后图111笫笫跚笆鹾蟮腦线片第一章材料与方法间盘各1个，111试剂裂解提取总1111椒A醋R祭3觥11诞1中蛋白聚序列11覩11G1型胶原、多聚蛋白多糖11跫1°1嬖it湫111,随后1E变性1111嫜巾11,共进行1个循环，再1E延伸11111跫1°1嬖U•湫11111产物经电泳、凝胶条i1

7、硎荆1嘧槭1芥浔冉喜捎梅讲罘治觯1搅奖冉喜捎脛检验。青岛人学硕士学位论文第二章实验结果22体外转染鼠的椎间盘细胞转染效率转棊因细胞移棺的效果足通过评价针各组术沿2埽2鹾2周相对于术前的％第二章实验结果术后1苷鉍赍椋11低于实验组和空U对照组，差异釘显著性111.1,11.1、1.1,111111.1;实验坌1111略低于空白对照组,窄白组22各组蛋白聚糖和2型胶原22农达比较均有显著性意义222222222琿2.2®2.2,2222。实验组与空白对照组222。见表22。表22术后2芨髯榈鞍拙厶呛廷蛐

8、徒涸2蓊2泶锉冉22埼i2第二章劣验结果13333333均有显著性意义333333333琿3.3®3.3,3333。实验组与空白对照组白聚糖33表达333。见表3甄。3喂胶原33表达333宵岛大学硕士学位论文i3333染效率并能实现较强的基因表达。tt岛人学硕I•学位论文以稳定结合治疗MW,川*以感染分裂期和非分裂期的多种细胞，尤病毒站W表达和的椎间盘可以增加蛋多糖的介成并持续S堋1疚亩訟ML体外转染鼠椎间盐细胞再移杭的效果进行了研究，结果显示，觀#意义，但足两组这两个指标的农达5:都明敁尚于针刺纟

9、II,差界行妞著性意义.说叨鼠椎间盘细胞后再移楨苹人鼠的椎间盘中对于増加两个指标表达量的作川卜.处非常明显的，在一定程度上也反映出其可以延缓椎间盘退变的进程。细胞移植治疗具Yf增加多聚蛋n多糖的表达ffl的潜能，同时也具有阻止或者减缓椎间盘退变的潜能，已经有很多研究在动物模型上证实了14体椎w盘细胞和软骨细胞移植的可行性，而且表明K可以延缓椎间盘的退变6删。木实验将基W治疗和细胞移棺治疗充分的结合在一起，先在体外转染原代培养的人鼠椎间盘细胞，然G移植进入人鼠的椎间盘内