兔椎间盘髓核细胞体外生物学特性的实验研究

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1、万方数据中国修复重建外科杂志2008年9月第22卷第9期兔椎间盘髓核细胞体外生物学特性的实验研究刘杰王建周跃·112l·【摘要】目的对兔椎间盘髓核细胞进行体外培养，观察细胞的形态、表型及超微结构改变，研究其体外生物学特性。方法取2周龄健康新西兰白兔椎间盘髓核组织，在含有15％灭活FBS的DMEM／F12培养液中培养，倒置相差显微镜下观察原代和传代细胞形态。分别在取材后、原代、第1代、第2代细胞培养期间，进行髓核细胞活力测定；爬片培养后进行甲苯胺蓝、HE、聚集蛋白聚糖番红O、I型及II型胶原免疫组织化学染色观察；MTT法绘制髓核

2、细胞生长曲线，并行原代及第2代细胞透射电镜观察，对体外细胞的生物学特性进行研究。结果倒置相差显微镜见原代髓核细胞呈类圆形，折光性较强；5d开始有细胞贴壁，细胞呈多角形或短梭形；6～8d细胞生长进入指数生长期；约17d时，细胞长满瓶壁，可进行传代；随传代次数增加，细胞形态逐渐由多角形、短梭形向长梭形改变。髓核细胞活力测定在刚分离完成后细胞活力为95％～97％，原代培养期间为98％～100％，第1代培养期间仍能维持为100％，第2代细胞活力下降较为明显，为75％～80％。髓核细胞甲苯胺蓝染色呈强阳性：HE染色见细胞核、细胞质着色明

3、显。第l代髓核细胞I型胶原免疫组织化学染色呈阴性，II型胶原免疫组织化学染色呈阳性，聚集蛋白聚糖番红0染色呈阳性；第2代细胞I型胶原免疫组织化学染色呈阳性，II型胶原免疫组织化学染色呈弱阳性，聚集蛋白多糖番红O染色着色较浅。MTT生长曲线与体外细胞培养时生长过程相符。透射电镜显示原代髓核细胞内线粒体少，胞质内有大量糖原颗粒，随传代次数增加，糖原颗粒减少，线粒体数量增多，细胞器开始肿胀。结论明确了兔髓核细胞体外生物学特性变迁，为组织工程髓核的种子细胞研究提供了实验依据。【关键词】组织工程髓核细胞体外培养生物学特性兔中图分类号：R

4、681．5R687．1文献标志码：AEXPERIMENTALSTUDY0NBIoLoGICALFEATUREOFRABBITINTERVERTEBRALDISCNUCLEUSPULPOSUSINVITRO／LIU1ie,WANGJian，ZHOUYue．DepartmentofOrthot，aedics,XinqiaoHospital,theThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400037，P．R．China．Correspondingauthor：WANG]ian，E—mail：

5、tonywjxq@yahoo．corn．cn[Abstract]0bjectiveToresearchthebiologicalfeatureofintervertebraldiscnucleuspuiposuscells(NPCs)byobservingcellmorphous，phenotypeandultramicrostructure．MethodsTheNPCsfrom2-week-oldhealthyrabbitwereculturedinDMEM／F12mediumwim15％FBS．Thecellbiologi

6、calfeatureswereobservedbyinvertedphasecontrastmicroscope．1ightmicroscope，electronmicroscope，cellvitalityassay，cellgrowthcurveandcellsstainingafterharvestandduringtheperiodsofculturingtheprimary，the1stpassageand2ndpassage．ResultsTheresultsofinvertedphasecontrastmicro

7、scopeshowedthattheprimarypassageadheredat5days，grewexponentiallyat6-8days，andweresubcuhuredaftercoveringthebottomat17days．ThephenotypeoftheNPCschangedfrompolygontolongfusiform州tIlpassageincreased；thevitalityassayshowedthattherewasabout95％一97％，98％-100％，100％and75％一80％

8、NPCssurvivedjustafterisolationfromintervertebraldisc，duringtheperiodofculturingtheprimary，the1stpassageandthe2ndpassage，respectively．Theto