骨髓间充质干细胞移植对兔退变椎间盘髓核细胞衰老影响的体内研究

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1、东南大学硕士学位论文骨髓间充质干细胞移植对兔退变椎间盘髓核细胞衰老影响的体内研究姓名：黄勇申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：吴小涛2012-05-25中文摘受中文摘要骨髓间充质干细胞移植对兔退变椎间盘髓核细胞衰老影响的体内研究东南大学医学院临床医学院目的：探讨骨髓问充质干细胞(BMSCs)移植对兔退变椎间盘中髓核细胞衰老信号途径的关键因素P16、P53表达的影响，以及对退变椎问盘的修复效应。方法：30只新西兰大白兔的L3／L4、L4／L5、L5／L6椎间盘经髓核抽吸法建立椎问盘退变模型。造模2周后各兔进行BMSCs移植术并分为4组：A组(J下常对照组)为

2、L2／L3，仅行椎间盘暴露；B组(退变对照组)为L3／L4，用微量注射器穿刺髓核一次；C组(透明质酸钠移植对照组)为L4／L5，髓核组织注入透明质酸钠；D组(BMSCs一透明质酸钠移植组)为L5／L6，髓核组织注入BMSCs一透明质酸钠混合溶液。30只兔子分三批，分别于移植术后第2、6、10周三个时间点进行椎I’日J盘MRI扫描并检测T2WI信号强度，HE染色观察椎间盘退变程度，逆转录PCR(RT—PCR)检测髓核组织中P16和P53的mRNA转录水平，Westernblot检测P16、P53的蛋白表达量与II型胶原含量。结果：移植术后第2、6周，D组与C组的T

3、2WI信号强度高于B组而低于A组，有统计学显著性差异(pO．05)。移植术后第10周，D组T2WI信号强度显著高于B组和C组，低于A组，有统计学显著性差异(p

4、'日J点，D组椎间盘退变程度比B、C组轻，A组椎间盘无明显退变。RT-PCR、Westernblot的结果提示：移植后2、6、10周各时间点D组的P16、P53的mRNA的转录水平与蛋白表达量明显低于B组及C组而高于A组，D组的II型胶原含量明显高于B组及C组而低于A组(p

5、蛋白表达以及II型胶原含量无显著性差异(P>O．05)。结论：BMSCs移植可以抑制兔退变椎问盘的髓核细胞衰老信号途径的关键因素p16、p53的表达并延缓椎问盘退变。[关键词]骨髓间充质干细胞；椎间盘退变；细胞衰老英义摘要EnglishAbstractEffectofBMSCstransplantationonthesenescenceafterrabbitintervertebraldiscdegenerationinvivoMedicalCollegeofSoutheastUniversityObjective：ToexploretheeffectofBMS

6、Cstransplantationonthetheexpressionofpl6andp53innucleuspulposuscellsofdegenerativeintervertebraldisc，andtheeffectofBMSCstransplantationfortreatingintervertebraldiscdegeneration．Methods：IntervertebraldiscdegenerationwasinducedbyannulusfibrosuspunctureandnulectomyatL3／IA，L4／L5andL5／L6t

7、hreediscsin30NewZealandwhiterabbits．Twoweeksaftertheprocedure，eachrabbitunderwenttransplantationandwasdividedintofourgroups：theL2／L3wasonlyexposedandwassettothenormalgroup(groupA)；thenucleuspulposusofL3／L4waspuncturedbyamicroinjectoronetimeandL3／LAwassettothedegenerativegroup(groupB)

8、；thenucleuspulposusofL4／L5wasinjectedsodiumhyaluronatebyamicroinjectorandL4／L5wassettothesodiumhyaluronategroup(groupC)；thenucleuspulposusofL5／L6wasinjectedBMSCs—sodiumhyaluronatebyamicroinjectorandL5／L6wassettotheBMSCs—sodiumhyaluronategroup(groupD1．Alltherabbitswererandomlydividedi

9、ntothreebatc