sox9基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔退变椎间盘的实验分析

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1、中文摘要Sox9基闪转染兔骨髓问充质十细胞治疗兔退变椎问盘的实验研究浓度为l×106／ml的MSCs，基因转染组注入Sox9基因修饰过的MSCs，每个椎问隙注入量为209l。术后定期行X线及MRI检察，观察椎f’日J隙高度指数和髓核T2像信号变化。12周后取材，通过免疫组化检测II型胶原表达情况。分光度法检测蛋白多糖的含量变化。结果1．实验组术后4周MRI观察到髓核信号降低，术后12周发现椎间隙高度和髓核信号明显降低，退变明显。免疫生化结果显示实验组II型胶原和蛋白多糖含量较对照组明显减少(P<0．05)。2．体外

2、分离、培养和传代的兔MSCs具有增殖快，可重复性强等优点，是较理想的组织工程种子细胞之一。3．Sox9慢病毒载体转染MSCs后在倒置显微镜下细胞呈多角形，胞体增大，生长良好，胞内充满绿色荧光物质，转染率为90％以上。经MTT法和流式细胞仪检测发现转染对细胞的增殖以及细胞凋亡率无影响。Western．blot检测结果显示基因转染组Sox9蛋白表达明显高于空白对照组和空慢病毒载体转染组。4．术前，术后第4、8、12周行X线及MⅪ检查，对照组随着时间的推移椎问隙高度和髓核信号进行性降低；MSCs组椎间隙高度及髓核信号出现

3、轻度降低；基因转染组椎间隙高度及髓核信号未见明显降低。免疫生化检测发现II型胶原、蛋白多糖的含量在基因转染组最高，MSCs组次之，对照组最低。基因转染组疗效优于MSCs组(P

4、perimentalstudyofbonemesenchymalstemcelltransferredbySox-·9geneintreatmentofrabbitdegenerativeintervertebraldiscAbstractobjectiveToestablisharabbitmodelofdegenerativeintervertebraldiscinducedbypuncturingtheannuluswithneedleandaspiratingsomenucleuspulposusfromt

5、heintervertebraldiscs．Andtoevaluatetheeffectofbonemesenchymalstemcelltransferredbylentivirus—sox9constructureintreatmentofrabbitdegenerativeintervertebraldisc．Methods1．TheanimalmodelofdegenerativeintervertebraldiscoflumbarspineWasestablishedbypuncturingtheannu

6、luswithneedleandaspiratingsomenucleuspulposusfromtheintervertebraldiscs．NewZealandwhiterabbitswithoutspinaldeformityordegenerativeintervertebraldiscwereadopted．nlelumbarintervertebraldiscsofL3／4、L4／5、L5／6wereexposedandpuncturedtoaspiratenucleuspulposusby21Gsyr

7、igeneedle．ThepostoperativechangesofsurgicaldiscsweredetectedbyX-rayandMRI．12weeksafteroperation，thediscswereslicedtodetecttheconditionofdegeneration．Theexpressionoftype11collagenandproteoglycanwasmeasuredbyimmunohistochemistryandspectrophotometryrespectively．2

8、．TherabbitbonemesenchymalstemcellswereisolatedandculturedinvitroNewZealandwhiterabbits，twomonthsageandbodyweightof1．5--。2．5kg，wereadoptedforthisstudy．Bonemesenchymalstemcellswereco