转染hvegf165基因的骨髓间充质干细胞移植治疗兔心肌梗死论文

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1、转染hVEGF165基因的骨髓间充质干细胞移植治疗兔心肌梗死论文盛小刚，宋卉，冯建章，陈秋雄，吴书林【关键词】心肌梗死；,骨髓间充质干细胞；,血管内皮生长因子【关键词】心肌梗死；骨髓间充质干细胞；血管内皮生长因子1材料和方法1.1材料健康纯种新西兰大白兔48只，雌雄不拘，体质量2.0~2.5kg，兔龄4~5mo.freelacia产品）；VIII因子多克隆抗体及免疫组化检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；BrdUmAbBrdU检测试剂盒（Roche产品）；AdTrackCMVVEGF165真核表达质粒（由广

2、东省人民医院中心实验室惠赠）；LipofectamineTM2000reagent(GIBCOL).1.2方法1.2.1实验分组将兔随机分为4组（n=12），心肌梗死2L，应用Percoll分离液(1.073kg/L)离心提取MSCs，用含100g/L胎牛血清的低糖DMEM进行培养.在细胞接近汇合时以1∶3的比例传代.在移植前6d用BrdU对细胞进行标记.1.2.4pAdTrackCMVVEGF165的制备及转染MSCs试验参照文献［2］的方法和说明书操作进行.1.2.5血流动力学指标测定在移植后4ax）和最大下

3、降速率（-dp/dtmax）.1.2.6疤痕区MSCs的鉴定及计数取缝线标记区切片行BrdU免疫组化染色.，计算视野内BrdU阳性染色细胞数作为MSCs数目.切片染色后计算视野内的阳性细胞数，并取平均值作为该兔血管数目.统计学处理：数据采用SPSS11.0软件进行处理，计量资料以x±s表示，组间均数比较采用t检验，计数资料以χ2检验进行比较，P0.05为差异有统计意义.2结果2.1各组兔死亡率至实验结束，共死亡兔13只.MI，MSCs，VEGF和M+V组各组死亡兔数分别为5,2,4,2只，各组间死亡率无明显统计差

4、异.各组兔左心室功能血流动力学变化见表1.表1各组兔左室血流动力学比较（略）2.2梗死区MSCs的鉴定及计数心肌梗死区见BrdU阳性细胞存在.M+V组（61±8个/视野）存活的MSCs明显多于MSCs组(44±8个/视野,P0.01).2.3梗死区血管的数量比较MI组梗死区(18±4个/视野)明显少于VEGF组（30±8个/视野,P0.01）；MSCs组（33±6个/视野）明显多于MI组（P0.01）；M+V组（49±8个/视野）明显多于MSCs组（P0.01）,VEGF组（P0.01）和MI组（P0.01）.3

5、讨论本研究结果表明：VEGF基因治疗与MSCs移植结合可改善兔心肌梗死后心功能，其疗效明显优于单纯MSCs移植.本研究中VEGF组将VEGF基因裸质粒直接注射入梗死区，发现其梗塞区有新生血管增多，但却对心功能无明显改善，这提示虽有新生血管的增生，但尚不足以改善大面积心梗后的心功能.我们先前的实验结果表明：VEGF基因能成功转染MSCs中并获得稳定表达，表达的VEGF具有生物活性，田竞等［1］也报道了VEGF基因在兔骨髓基质细胞中的成功表达.我们在实验中进一步探讨了转染VEGF基因的MSCs移植对心梗后心功能的影响

6、，发现其对心功能的改善明显优于单纯VEGF或MSCs移植组，在梗死区存活的MSCs和新生血管数明显增多.说明将细胞移植和基因治疗相结合可能是治疗缺血性心脏病更佳方案.本实验结果还显示：M+V组心功能优于MSCs组，可能的原因是缺血区血供的改善使冬眠心肌功能恢复，从而使心功能得到进一步改善.Kloner等［2］在大鼠左室游离壁4个位点注射125μgphVEGF165时，未见梗死面积缩小和心功能改善，注射500μgphVEGF165时则有效.本研究中我们将100μgVEGF质粒注射至兔心梗区，也未能见其心功能改善.V

7、EGF基因裸质粒治疗心肌梗死需要多大剂量才能产生疗效，多大剂量出现副作用还有待进一步探讨.【