原花青素对aβ2535诱导pc12细胞周期紊乱的保护作用

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1、原花青素对Ae2535诱导PC12细胞周期紊乱的保护作用作者：谢朝阳梅寒芳祝其锋吴斌华陈小芳【摘要】目的观察原花青素(PAC)对3淀粉样肽(2535)诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期紊乱与凋亡的保护作用，并探讨其可能的作用机制。方法采用血清饥饿培养使PC12细胞同步于GO期，PAC预处理后加入A02535，通过流式细胞仪分析细胞周期与凋亡，RTPCR和Western印迹从mRNA及蛋白水平检测p21、CyclinDl、pRb和E2F1基因表迗的变化。结果与A32535诱导组比较，PAC保护组S期细胞百分率明显减少，凋亡率明显降低(P<);p21mRNA和蛋

2、白表达增加(P<)，CyclinDl、E2F1mRNA和CyclinDl、pRb蛋白表迗降低(P<)。结论PAC对O2535诱导的PC12细胞周期紊乱与凋亡起保护作用，其机制可能与上调p21表达，下调CyclinDl、pRb、E2F1表达有关。【关键词】原花青素；AP2535；PC12细胞；细胞周期；基因表达[Abstract]ObjectiveToobservetheprotectiveeffectsofProanthocyanidinsonabnormalcelleyeleinPC12cellsinducedby3amyloidpeptide2535ands

3、tudyitspossiblemechanisms.MethodsPC12cellsweresynchronizedby24hserumdeprivation,pretreatedwithPACforlh,andthenA325〜35for0〜24h.Thechangesofce11eyeledistributionandapoptosiswereanalyzedbyflowcytometry.ProtEinandmRNAexpressionsofp21,CyclinDl,pRbandE2FlweredetectedbyRTPCRandWesternblotre

4、spectively.ResultsComparedwiththoseinA325〜35group,thepercentofSphasecellsandapoptoticrateweredecreasedremarkably(P<)inPACgroup,themRNAandprotEInexpressionsofp2lgenewereincreased，andtheexpressionsofCyclinDl,pRbandE2Flgeneweredecreased(P<).ConclusionsPAChasprotectiveeffectsofredistribu

5、tionofee11eyeleandapoptosisinserumdeprivedPC12cellsinducedbyA325〜35,whichisrelatedwithupregulatingp21expression,anddownregulatingCyclinDl，pRbandE2Flgeneexpressions.[Keywords]Proanthocyanidins；A325〜35;PC12cell；Cellcycle；Geneexpression研究表明原花青素不仅具有促进肿瘤细胞凋亡〔1〕、清除自由基和抗氧化应激〔2)、改善免疫抑制〔3)等作用

6、，还能提高多种细胞的增殖活性(4)。阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)是一种老年神经系统退行性疾病，病因十分复杂。近年研究表明AD病理变化可能与细胞周期调控紊乱有关。本课题组的研究也表明，3淀粉样肽2535诱导血清饥饿培养PC12细胞周期紊乱、凋亡，伴有细胞周期相关蛋白表迗异常〔5)，而PAC可剂量依赖性对抗A32535对PC12细胞的毒性作用，增加PC12细胞的存活率(6〕。本实验以已建立的AP2535诱导血清饥饿培养PC12细胞为受损神经元模型，进一步研究PAC对受损神经元的保护作用是否与细胞周期调控有关。1材料与方法材料PC12细胞

7、由军事医学科学院基础医学研究所马子敏博士惠赠；AP2535购于Sigma公司；DMEM及马血清均购自Gibco公司；P21、CyclinDl小鼠抗大鼠单克隆抗体、pRb(Ser780)兔抗大鼠多克隆抗体、ECL拭剂为SantaCruz公司产品；RTPCR试剂盒为大连宝生物工程公司产品；胎牛血清为杭州四季青公司产品；琼脂糖为Amresco公司产品；各种规格培养皿均为美国CorningCostar公司产品；引物为上海生物工程公司合成。PAC购自南京学子医化研发中心，为葡萄籽提取物，质量分数大于95%，用DMSO溶解配成贮存液，DMS0终浓度＜%以八)；其余试剂为国产

8、分析纯。方法细胞培养方法