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1、高效液相色谱法测定洋蓟叶中洋蓟素含量杨海英杜刚杨阳张建胜李正全李干鹏【摘要】目的建立了测定洋蓟叶中洋蓟素含量的高效液相色谱方法。方法用水加热回流提取样品，采用Shim-packCLC-ODS色谱柱（150mm×6mm，5μm），乙腈-2%的醋酸水溶液（13∶87）等度洗脱，检测波长320nm。结果洋蓟素在0.0049～0.196mg·ml-1范围内线性关系良好，平均回收率为98.12%,相对标准偏差（RSD）为1.01%。结论该方法快速、简便、准确，可用于洋蓟叶中洋蓟素的含量测定。【关键词】洋蓟叶洋蓟素高效液相色谱法洋蓟Cynarascolymus
2、L.又名朝鲜蓟、菊蓟、菜蓟、荷兰百合,为菊科菜蓟属多年生草本植物,原产地中海地区，20世纪90年代传入我国，在浙江、云南等地有一定规模栽培〔1〕。洋蓟有较高营养价值和药用价值,经研究发现洋蓟叶中含有绿原酸、洋蓟素、黄酮类化合物、天冬酰胺等成分，可促进胆汁分泌，促进氨基酸代谢，具有抗氧化、降低胆固醇、抗微生物等活性作用。用于治疗消化不良、肝病等疾病〔1〕。 洋蓟素（Cynarin）又称洋蓟酸，朝鲜蓟酸，菜蓟素，洋蓟苷，1,3-二咖啡酰奎宁酸，是洋蓟抗氧化、抗微生物作用的主要活性成分之一〔2，3〕。明确洋蓟中的洋蓟素含量，对于洋蓟的食用、药用成分等综
3、合开发有着重要的意义。目前,只有对洋蓟中的绿原酸及天冬酰胺进行含量测定的报道〔4，5〕，洋蓟叶中的洋蓟素含量测定国内尚未见报道。本实验就云南省引进栽培的洋蓟中洋蓟素的提取及检测分析方法进行了初步研究，筛选并建立了快速、准确测定洋蓟素含量的反相高效液相色谱方法。 1仪器与试剂 日本岛津SPD-10AT高效液相色谱仪：SPD-10Avp检测器；SIL-10AP自动进样器；超纯水器(arium611UF,Sartorius)；超声波清洗器(AS3120A，天津瑞森特)；电子天平(AdventurerTM，AR2140，上海奥豪斯公司)；旋转蒸发仪(R
4、-200,瑞士Buchi)。岛津UV2100型紫外-可见光谱仪。 乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，蒸馏水自制，其它试剂均为国产分析纯试剂。洋蓟素对照品购自成都普瑞法科技开发有限公司（纯度≥98%）。洋蓟叶由昆明卡麦生物科技有限公司提供，栽种于云南省陆良县。洋蓟样品由云南中医学院杨礼攀副教授鉴定为菊科菜蓟属CynarascolymusL.的干燥叶。 2方法和结果 2.1色谱条件色谱柱为岛津Shim-packCLC-ODS柱（150mm×6mm，5μm），流动相为乙腈-2%的醋酸水溶液（13∶87），流速1ml·min-1，检测波长320n
5、m，柱温30℃，进样量20μl。 2.2对照品溶液的制备称取洋蓟素适量，精密称定，用流动相溶解，制成每毫升含洋蓟素0.196mg的对照品储备液,置于4℃的冰箱中避光保存。取对照品溶液适量，加流动相制成0.0049，0.0098,0.0196，0.049，0.098mg·ml-1系列标准溶液。 2.3供试品溶液的制备取洋蓟叶样品粉末（洋蓟叶阴干，粉碎过50目筛）约2.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入蒸馏水25ml,加热回流提取30min（加热温度：85℃）,放冷滤过,药渣加25ml蒸馏水,按上述方法回流再提取1次,滤液过滤后合并,浓缩蒸干,残
6、渣加流动相溶解,转移至100ml棕色容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,溶液经0.45μm滤膜过滤,作为供试品溶液。色谱图见图1。 图1HPLC色谱图（略） 2.4线性关系和检测限将“2.2”项下制好的系列浓度的对照品溶液分别进样20μl，以其组分峰面积Y对其质量浓度X（mg·ml-1）进行线性回归，得到回归方程：Y=6E+07X-1725.3，r=0.9998,线性范围：0.0049～0.196mg·ml-1。将标准品溶液无限稀释，测出检出限为0.05μg·ml-1（S/N=3）。 2.5精密度实验将“2.2”项下制好的标准溶液（0.1
7、96mg·ml-1）按色谱条件平行测定5次，计算出洋蓟素峰面积的相对标准偏差为0.93%,表明仪器精密度良好。 2.6稳定性实验取样品试液（“2.3”项方法配制）放置0，1，2，6，16，24h，分别按“2.1”色谱条件测定，测得洋蓟素的峰面积RSD为1.20%。表明样品放置24h稳定。 2.7回收率实验精密称取已知含量的洋蓟叶样品粉末1.2g,加入一定量的洋蓟素对照品液,按供试品制备测定方法操作,计算回收率，结果洋蓟素平均回收率为98.12%，RSD为1.01%（n=5）。 2.8样品的测定按“2.3”项方法制备的样品溶液，采用上述色谱条
8、件进行分离,经测定，洋蓟叶样品中洋蓟素的含量（质量分数）为0.683%（n=3）。 3讨论 3.1流动相的选择由于洋蓟
