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时间:2018-11-10
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1、大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的高效液相色谱法测定作者:陈夏静,姚汉玲,张秋琼,张秀桥,刘焱文【摘要】 目的建立高效液相色谱法测定大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的方法。方法色谱条件:AngilentTC-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85,V/V),检测波长为290nm。结果蛇葡萄素的回归方程为Y=24061X+40.07(r=0.9999,n=6),线性范围为0.101~1.101μg;平均回收率为99.65%,RSD为1.49%。结论该方法简单、结果可靠,为大叶蛇葡萄药材的质量控制提供了快速准确的测定方法。【关键词】高效液相色谱法
2、;大叶蛇葡萄;蛇葡萄素 Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfordeterminationofthecontentofAmpelopsininA-mpelopsismegalophyllaDielset.GilgbyHPLC.MethodsTheseparationm×250mm,5μm)obilephase,andthedetection.ResultsTheregressionequationandcoefficientpelopsin.Thelinearrangepelopsinethodissimple,accurateandcan
3、beusedforthequalitycontrolofAmpelopsininAmpelopsismegalo-phyllaDielset.Gilg. Keypelopsismegalophylla;Ampelopsin 大叶蛇葡萄AmpelopsismegalophyllaDielset.Gilg是葡萄科蛇葡萄属的一种植物,是湖北恩施地区民间习用中草药,其性平,味酸、涩,具有清热利湿、活血化淤之功效,用于治疗痢疾、泄泻、小便淋痛、头昏目胀、高血压等病[1]。现代药理学研究表明,大叶蛇葡萄中的主要化学成分蛇葡萄素具有多种药理活性,如保肝护肝、抗肿瘤和降压等[2~4]。本
4、实验室已对大叶蛇葡萄有效部位进行了指纹图谱研究[5]。为了更好地控制其质量,本文用高效液相色谱(HPLC)法对不同来源的大叶蛇葡萄中的蛇葡萄素进行了含量测定。 1仪器与材料 Agilent-1100系列高效液相色谱仪(四元泵);紫外检测器及配套色谱工作站;KQ-250B型超声超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);AL204型万分之一电子分析天平(Mettler-ToledoGroup)。对照品蛇葡萄素自制,从大叶蛇葡萄中提取分离得到,经UV、MS、H-NMR、IR光谱分析鉴定结构,并经HPLC面积归一化法检测,含量98.0%;大叶蛇葡萄(2009-02采自湖北恩施地区,
5、并由本院生药教研室鉴定)。乙腈为色谱纯;水为双蒸水,其余试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:AngilentTC-C18(4.6mm×250mm,5μm)。流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85,V/V);流速:1ml/mim;柱温:30℃;检测波长:290nm;进样量:10μl。 2.2对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的蛇葡萄素对照品适量,加甲醇制成每毫升含蛇葡萄素0.101mg的溶液,作为对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备精密称取样品(过60目筛)约0.1g置锥形瓶中,甲醇25ml,浸泡30min,超声提取30min,甲醇定容至30ml,
6、摇匀,过滤,精密吸取续滤液1ml于25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液。 2.4系统适用性实验取对照品溶液、供试品溶液于上述色谱条件下进样,得HPLC图(见图1)。结果在该色谱条件下,供试品在对照品色谱保留时间相应处有相应色谱峰,且样品可得到较好的分离,理论塔板数按蛇葡萄素峰计算大于3000。 2.5线性范围的考察精密量取对照品溶液1,2,4,6,8,10ml于10ml量瓶中,加甲醇至刻度,配置成浓度分别为0.0101,0.0202,0.0404,0.0606,0.0808,0.101mg/ml的对照品溶液,按上述色谱条件依次注入高效液相色谱仪,以峰面积(Y
7、)为纵坐标,以标准品的浓度(X)为横坐标,得蛇葡萄素回归方程:Y=24061X+40.07(r=0.9999,n=6)。结果表明,蛇葡萄素对照品在0.101~1.101μg范围呈良好的线性关系。 2.6精密度实验精密吸取蛇葡萄素对照品溶液10μl,连续进样6次,测定峰面积值,计算RSD为0.66%。结果表明,仪器精密度良好。 2.7稳定性实验取供试品溶液10μl分别于0,2,6,8,12,24h间隔进行测定,测得结果基本一致,峰面积的RSD为1.20%。结果表明,供试品溶液在24h内稳定。 2.8
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