芒果叶中芒果苷含量的测定 高效液相色谱法.doc

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1、ICS65.020.01ICS65020.30B43GB中华人民共和国国家标准GB/TXXX-XXXIGB/XXXX—XXXX芒果叶中芒果苷含量的测定高效液相色谱法Determinationofmangiferininmango(MangiferaindicaL.)leaves–high-performanceliquidchromatorgraphyXXX-XX-XX发布XXX-XX-XX实施中华人民共和国标准化管理委员会发布GB/XXXX—XXXX前  言本标准按照GB/T1.1-2009给出的

2、规则起草。本标准由中国热带农业科学院提出。本标准由中国标准化研究院归口。本标准起草单位：中国热带农业科学院分析测试中心，中国标准化研究院。本标准主要起草人：阳辛凤，兰韬，席兴军，韩丙军，赵方方，张月，郭晓杰，王盼GB/XXXX—XXXX1　范围本标准规定了用高效液相色谱-质谱法测定芒果叶中芒果苷含量的原理、材料、仪器与设备、测定步骤、结果计算与表示、精密度和回收率、检验报告。本标准适用于芒果叶中芒果苷含量的测定。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期

3、的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8855水果和蔬菜取样方法3　原理样品经提取后，将提取液过滤，经反向高效液相色谱分离测定，在258nm下检测，根据保留时间定性，外标峰面积定量。4　试剂与材料4.1试剂4.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.4甲醇溶液（70%）：甲醇与超纯水按照7:3体积比混合。4.1.5甲酸溶液

4、（0.1%）：1L超纯水中加入1mL甲酸。4.1.6芒果苷（mangiferin，C19H18O11，CAS:4773-96-0）对照品：纯度≥98%。4.1.8流动相：乙腈（4.2）：甲酸溶液（4.5）=15:85（体积比）。4.1.9芒果苷标准储备溶液（200μg/mL）：称取10mg（精确至0.10mg）芒果苷对照品，置于50mL容量瓶中，加甲醇（4.1）超声溶解并定容至刻度线，混匀，配制成200μg/mL的标准储备溶液，–18℃冰箱避光保存，有效期3个月。4.1.10芒果苷中间浓度标准溶液：

5、准确移取0.5mL芒果苷标准储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇溶液（4.1）稀释至定容刻度线，摇匀，得到芒果苷中间浓度标准溶液（质量浓度10μg/mL）。–18℃冰箱避光保存，有效期1个月。GB/XXXX—XXXX4.1.11芒果苷系列标准工作液：分别准确移取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL芒果苷中间浓度标准溶液于不同的10mL容量瓶中，用70%甲醇溶液（4.4）稀释、定容刻度线，摇匀，得到芒果苷系列标准工作溶液（质量浓度分别为0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、

6、1.0μg/mL、2.0μg/mL）。2～8°C保存，有效期2周。4.1.12除另外有规定外，所用试剂均为分析纯，水应复合GB/T6682中一级水的要求。4.2.材料4.2.1离心管：100mL（螺旋盖）。4.2.2三角瓶：250mL（磨口塞）。4.2.3容量瓶：10mL，50mL，100mL，250mL。4.2.4刻度玻璃移液管：1mmL4.2.5针式微孔滤器：孔径0.22μm，直径13mm的聚四氟乙烯（PTFE）滤膜或者相当者。5仪器和设备5.1液相色谱仪：配紫外（UV）检测器或PDA、DAD检

7、测器。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3电子天平：感量0.01g。5.4超声波振荡器：功率不低于250W，或相当的设备。5.5组织捣碎机5.6高速组织匀浆机5.7涡旋振荡器6测定步骤6.1试样制备、保存按照GB/T8855水果和蔬菜取样方法。新鲜芒果叶片充分打碎（5.5）、混匀，置于洁净容器中，密封并做好标记，于–18℃冰箱避光保存。6.2提取芒果叶试样（6.1）解冻，称取芒果叶试样1.00g(精确至0.01g)，置于100mL离心管（4.2.1）中，加入提取溶剂70%甲醇溶液（4.1.4）50

8、mL，18000rpm高速匀浆1min（5.6），将样品转移到250mL具塞磨口三角瓶（4.2.2）中。分别用40mL、30mL提取溶剂洗涤离心管和刀头共2次，溶液均合并至三角瓶中。将三角瓶瓶塞盖上，放入超声清洗仪（5.4）中，室温下超声提取30min。取出，静置20min，使分层。将上清转入250mL容量瓶中（4.2.3），样品碎渣保留在三角瓶中。三角瓶中加入70%甲醇溶液（4.1.4）100mL，超声30GB/XXXX—XXXXmin，进行二次提取。容量瓶上放置漏