大肠埃希菌的微生物检验分析

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1、大肠埃希菌的微生物检验分析陆春光（黑龙江省中医药科学院黑龙江哈尔滨市150036）【摘要】目的：探讨大肠埃希菌的微生物检验。方法：对大肠埃希菌采集培养及操作步骤进行分析。结果：大肠杆菌常引起各种肠内外感染，是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌。结论：革兰阴性杆菌很多是条件致病菌，且有许多细菌对很多抗生素天然耐药。有些细蘭是医院感染的常见细蘭。【关键词】大肠埃希菌；细菌检验；操作方法【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）16-0235-02大肠埃希菌俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属的一个种。木菌是人类和动

2、物肠道正常菌群的主要成员。每克粪便中约含109个大肠杆菌。因其广泛分布于自然界（水、土壤、食品、牛乳等），故卫生学上将其作为卫生监督的指示菌。从对肠道的作用来看，可将其分为致病性与非致病性两大类［1】。其血清分群用0:K：H表示。0抗原（菌体抗原）迄今己有171种，是血清分型群的基础；K抗原（荚膜抗原），有99种；H抗原（鞭毛抗原）有60种。一些血清型对肠道生理起着重要作用，另一些血清型能引起不同特征性腹泻和肠道外感染。主要致病的有肠致病性大肠杆菌、肠道聚集一粘附性大肠杆菌、产肠毒素性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌，兼性厌氧

3、。现对大肠埃希菌操作分析如下。1.大肠埃希菌主要特征1.1形态特征大肠埃希菌大小为1.1〜1.4μm×2.0〜6.0μm（活菌｝或0.4〜0.7μm×1.0〜3.0μm（干菌和染色菌），多数有周身鞭毛，能运动，周身还有菌毛，无芽孢，某些菌株有膜，单个存在，少数成对。1.2培养特征最适生长温度为37°C，pH为7.4〜7.6,普通培养液上生长良好，形成直径2〜3mm、圆形、凸起、湿润、光滑、灰白色、半透明、边缘整齐的菌落。在血琼脂平板上，某些菌株可产生β-溶血环。在伊红-亚甲蓝琼脂平

4、板上，菌落呈蓝紫色，在中国蓝琼脂平板上为蓝色。在SS琼脂平板上多数被抑制，生长菌落为红色，在营养肉汤内均匀浑浊生长。1.检査方法2.1普通大肠埃希菌检查2.1.1标本采集以无菌操作采取血液、脑脊液、尿液、胆汁、脓液、痰及分泌物、水等。2.1.2分离培养血液标本先接种于肉浸汤内增菌后（细菌生长，肉汤浑浊），移种血琼脂平板和伊红-亚甲蓝琼脂平板上。体液标本取离心沉淀物，脓液、痰、分泌物等直接划线接种于以上培养液上，35〜37°C培养18〜24h后，观察菌落形态。尿液除做分离培养外，尚需冋吋做尿中细菌总数测定。2.1.3菌种鉴定初步鉴定根据菌落

5、形态涂片染色并做氧化酶、触酶、硝酸盐等生化反应。可初步定为大肠埃希菌［2】。最简便的方法是采用肠杆菌科试剂盒，根据反应结果编码后作出最后鉴定。2.2肠道感染细菌学检查引起肠道感染（腹泻）的大肠埃希菌主要有三组：产毒素型大肠杆菌、肠致病性大肠埃希菌及肠侵袭性大肠埃希菌。它们的生物学特性与普通人肠杆菌相同，但具冇特殊的血清型或肠毒素。2.2.1不耐热肠毒素（LT）检测2.2.1.1兔肠段结扎法用2kg左右的健康家兔，禁食2d后麻醉剖腹取出小肠，自冋肠末端开始结扎，每段5cm共6段，其中一段为阳性对照，另一段为阴性对照，余4段注入试验菌的肠毒素

6、液（培养的上清液＞lml,然后将小肠放回原处，缝合腹壁，24h后计算每厘米肠段中肠液蓄存量，如阴性对照肠段未见肠内存液体，阳性对照肠内充满液体（可达2ml/cm3）,实验肠段液体≥lml/cm3者为阳性反应，表示被检菌能产生LT。2.2.1.2皮肤毛细血管通透性亢进试验将兔背部或豚鼠腹部剃毛后，皮内注射被检菌培养上清液0.1ml，24h后，耳静脉内注射伊文蓝液（50g/L的色素溶于4.5g/L的NaCI溶液中），每kg体重注入1.2ml，lh后，量取注射部位蓝色斑的直径。测量时再根据蓝色斑的深浅分成1〜8度，判定结果，以蓝色斑的深浅

7、度乘以蓝色斑的直径值表示之。2.2.1.3琼脂扩散法（Elek法）取已分纯并鉴定为大肠埃希菌者移种于艾立克琼脂平板上，均匀涂布呈椭圆形，35°C培养48h后，将浸有2万U/ml的多黏菌素纸片贴于菌落上,35°C培养5〜6h后，在中心离菌苔4〜5mm处开约直径4mm孔，放入己提纯并己稀释的LT抗血清20〜30ml。同吋在各菌苔外缘挑取7mm直径的琼脂块各4个，浸泡于0.5mlpH7.0，O.Olmol/LPBS中，放冰箱过夜用ST测定［3】。然后将平板置35°C培养15〜20h,观察结果，凡与LT抗血清产生沉淀线的试验菌为LT阳性。2.2.

8、2耐热肠毒素检查2.2.2.1乳鼠灌胃法（ST检测法）取已制备好的ST浸泡液（见Elek法）或被试菌培养滤液0.1ml，经U饲喂1〜3d龄的瑞士种乳鼠，4h后取出全部肠管秤重，再计算肠重与剩余