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时间:2020-04-04
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1、幻灯片1大肠埃希菌的检测Error!Referencesourcenotfound.幻灯片7甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基l胨10.0g 硫酸锰0.5mgl硫酸锌0.5mg 硫酸镁0.1g l氯化钠5.0g 氯化钙50.0mg l磷酸二氢钾0.9g 磷酸氢二钠6.2g l亚硫酸钠40.0mg 去氧胆酸钠1.0g lMUG 75mg水1000mLl除MUG外,取上述成分,混合。微温溶解,调节PH7.2-7.4,加入MUG,溶解,每管分装5mL,灭菌。幻灯片8实验步骤:l取供试供试液1mL,直接或处理后接种在制好的100
2、mL胆盐乳糖培养基中,在37℃恒温箱中培养18~24h,进行增菌培养。l取上述培养物0.2mL,接种至含5mLMUG培养基的试管内培养,于5小时,24小时在366nm紫外灯光下观察,同时用未接种的MUG培养基做本底对照。l若管内培养物呈现荧光,为MUG阳性,不呈现荧光,则为MUG阴性。幻灯片9l观察后,沿着培养管的管壁加入数滴靛基质试液,叶面呈玫瑰红色,为靛基质阳性,呈试剂本色,为靛基质阴性。l本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。l靛基质实验原理l某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与
3、对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物。l幻灯片10伊红美蓝培养基(EMB培养基)l 蛋白胨水琼脂培养基100ml,20%乳糖溶液2ml,2%伊红水溶液2ml,0.5%美蓝水溶液1ml,将已灭菌的蛋白胨水琼脂培养基(pH7.6)加热溶化,冷却至60℃左右时,再把已灭菌的乳糖溶液,伊红水溶液及美蓝溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后,立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度,115℃灭菌20min。幻灯片11结果分析:l1.MUG、靛基质结果判断lMUG培养结果:在366nm紫外线下观察l靛基质结果:
4、液面呈玫瑰红色,为靛基质阳性;呈试液本色,为靛基质阴性lMUG阳性、靛基质阳性,判检出大肠杆菌;lMUG阴性、靛基质阴性,判未检出大肠杆菌;lMUG阳性、靛基质阴性或MUG阴性、靛基质阳性,需进一步做以下检查l幻灯片12l2。EMB培养结果判断lEMB培养18-24h后,检查有无疑似大肠埃希菌菌落(大肠埃希菌落形态特征见表),若无,判供试品未检出大肠埃希菌;若有,进一步做以下试验大肠埃希菌落形态特征l培养基菌落形态EMB呈紫黑色、浅紫色、篮紫色或粉红色,菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心,圆形,微突起,边缘整齐,表面光滑,湿润,
5、常有金属光泽。幻灯片13l检验依据:2010年版«中国药典»二部附录ⅪJ微生物限度检查法检验标准规定:口服制剂细菌数1g不得超过1000个;1ml不得超过100个。霉菌及酵母菌数1g不得超过100个。控制菌1g(1ml)不得检出大肠埃希菌。幻灯片14注意事项l1.实训过程要严格无菌操作。l2.供试液稀释及注入培养皿时应摇匀再取,供试液从制备至加入培养基不得超过1h.l3.配制MUG培养基时,务必调pH,否则pH偏高,MUG分解,本身则显荧光。l4.培养时间:供试品培养液接种于MUG培养基中的培养时间,一般在4h、24h 观察是
6、否产生荧光,如荧光很微弱,不能准确判断时,该延长培养至48h再观察结果。幻灯片15l谢谢观看!!
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