SB203580防治大鼠高氧肺损伤的作用与机制.doc

《SB203580防治大鼠高氧肺损伤的作用与机制.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、SB203580防治大鼠高氧肺损伤的作用与机制【摘要】　　目的：探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性抑制剂SB203580对新生大鼠高氧肺损伤产生保护作用的机制.方法：160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤+SB203580组和高氧肺损伤+生理盐水组，建立模型.作用12,24,72h和1echanismofprotectionfromhyperoxiainducedlunginjuryinnechloridegrouprandomly.Atthetimepointsof

2、12,24,72hand1epointof72hepointepointof72h,p38MAPKchloridegroup;inthetegoingon.Andateachtimepoint,theirconcentrationsentofSB203580throughblockingtheexpressionsofp38MAPK,theninhibitingtheexpressionofIL8andTGFβ1.　　【Keyitogenactivatedproteinkinase;IL8;TGFβ

3、1　　0引言　　我们在前期研究中发现，大鼠长时间暴露于高氧环境后，p38丝裂素活化蛋白激酶（p38mitogenactivatedproteinkinase,p38MAPK）得以激活并介导了急性肺损伤，p38MAPK特异性抑制剂SB203580对这种损伤具有明显的保护作用［1］，但具体的机制尚不清楚.有研究表明，白介素8（interleukin8,IL8）和转化生长因子β1（transforminggroa公司）;IL8和TGFβ1ELISA检测试剂盒（美国Mega诊断试剂有限公司）.　　1.2

4、方法　　1.2.1分组及建模　　将大鼠随机分为4组：空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤+SB203580组及高氧肺损伤+生理盐水组，每组40只.所有高氧肺损伤组置于常压高氧仓中，氧体积分数>0.95，CO2体积分数≤0.05；空气对照组置于同一室内，空气中氧体积分数为0.21.高氧肺损伤+SB203580组从高氧暴露第1日开始，给予SB203580（配制成10μmol/L）5mg/kg腹腔注射，1/d，共3d.高氧肺损伤+生理盐水组给予生理盐水5mg/kg腹腔注射，1/d，共3d.所有高氧肺损伤组每天

5、开仓1次，添加水及垫料，并将母鼠置于空气中休息1h,累计连续暴露于高氧环境72h.以上4组环境温度均控制在21~25℃，湿度60%~70%.　　1.2.2标本制备　　于12，24，72h和1in，13000g高速离心20min，取上清液.　　1.2.3APK抗体（1∶500），4℃过夜.TBST洗涤3次（15min/次），加入HRP标记的羊抗兔IgG（1∶500），37℃孵育1h，TBST洗涤3次（15min/次），DAB染色，适时终止.1.2.4ELISA法检测IL8和TGFβ1的含量取4个时相点的右肺

6、匀浆离心后的上清液为待测样品.严格按试剂盒说明书操作.在450nm波长处测定A值，根据吸光度在标准曲线中换算样品中IL8和TGFβ1的含量.　　统计学处理：计量资料以x±s表示，采用统计软件SPSS11.0进行分析，组间比较用非参数秩和检验,P<0.01为差异有统计学意义.　　2结果　　2.1APK的表达72h后，空气对照组未见p38MAPK表达，高氧肺损伤组可见p38MAPK表达；高氧肺损伤+生理盐水组p38MAPK表达明显强于高氧肺损伤+SB203580组（图1）.　　2.2ELISA法检测IL

7、8和TGFβ1的表达　　在高氧肺损伤组和高氧肺损伤＋生理盐水组中，肺组织IL8和TGFβ1浓度均随时间延长呈持续上升趋势；在各个时相点，高氧肺损伤组和高氧肺损伤＋生理盐水组IL8和TGFβ1浓度均高于空气对照组和高氧肺损伤＋SB203580组（P<0.01，表1）.表1不同处理组新生大鼠右肺IL8和TGFβ1含量测定（略）　　3讨论　　IL8亦称中性粒细胞趋化和激活蛋白1（NAP1），主要由单核巨噬细胞产生，在肺部，还可由中性粒细胞、成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞等产生.LPS，

8、TNFα和IL1β等是IL8分泌的诱导剂.在高氧肺损伤的急性炎症期，肺泡巨噬细胞等分泌的TNFα，IL1β，IL8和IL6明显增加；随着高氧时间的暴露，TNFα，IL1β和IL6的表达逐渐下降，但IL8仍然处于高水平.IL8是具有强活性的中性粒细胞趋化因子，它可以导致中性粒细胞的大量激活、迁徙并聚集于肺部，在高氧肺损伤中起着极为重要的作用［7］.体外研究表明，IL8呈剂量依