抗氧化剂对新生大鼠高氧脑损伤的防治作用

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1、温州医学院硕士学位论文抗氧化剂对新生大鼠高氧脑损伤的防治作用研究生：孟卫霞导师：钱燕主任，林莲莲教授，陈超教授温州医学院，温州，浙江325003中又捅要目的l、探讨持续吸入高浓度氧造成新生大鼠脑损伤的机制；2、探讨并比较抗氧化剂丹参764—3和SOD对高氧损伤后新生大鼠脑的保护作用。方法1、模型和分组新生Sprague-Dawley大鼠出生6h内即置于02浓度≥90％的自制氧舱中，随机分为6大组，分别为高氧对照组、空气对照组、SOD预防组、SOD治疗组、丹参预防组、丹参治疗组。其中预防组又分为7d预防组和14d预防组(前者是指持续吸入高氧满7d即处死取标本，后者是指持续吸

2、入高氧满14d后处死)。调整各组新生大鼠数目，每组在8～16只之间。据Felderhoff—mueser【1J的报道，生后3～7d是新生鼠脑最易受高氧损伤的时期，故将l'--'7d用药组称为预防组，7～14d用药组作为治疗组。给药方法为每日清晨7时给药一次，高氧对照组与空气对照分别于生后相同的时间段腹腔注射等量的生理盐水。用药剂量：丹参为40mg／kg·d，SOD为2000U／kg·d。2、标本采集与检测每天记录新生大鼠的成活率、体重及状态。高氧对照组、空气对照组分别在生后满3d、7d、14d，余下4大组分别在生后满7d、14d，予t0％水合氯醛腹腔麻醉后，取出脑组织，立

3、即置于4％多聚甲醛固定液中，常规石蜡包埋，取海马水平做冠状切片，厚度为5Ilm，用于HE染色、免疫组化和TUNEL检测并计算凋亡指数(甜)。记录部分脑组织湿重与经冷冻干燥后干重，以计算脑湿／干重比值。结果1、存活率、体重、脑湿重／干重比值4组高氧对照组的存活率、体重均低于对应的空气对照组，其中高氧预防对照组14d和高氧治疗对照组14d差异显著(P

4、3预防组7d和SOD治疗组14d作用显著(P<0．05或P<0．01)，提示它能显著改善脑神经细胞水肿，减轻脑神经细胞损伤。2、脑H-E染色光镜下：高氧对照组脑组织神经元出现变性，表现为胞浆呈均匀的粉红色嗜酸性染色，细胞皱缩，部分细胞核深染，核仁不清。正常对照组几乎未见变性细胞，3d、7d组病变主要集中在大脑皮层，呈层状、灶2温州医学院硕士学位论文状改变。外侧较内侧明显，吸氧时问达14d时，病变开始累及海马区、齿状回，损伤程度随吸氧时问延长而有所加重。小脑累及不明显，中央白质、黑质、红核仅见少许散在的变性细胞，其它部位如纹状体、苍白球、丘脑均未见明显异常改变。使用抗氧化剂

5、后神经元变性有所改善，尤以丹参7d预防组为甚。3、血管内皮生长因子免疫组化染色结果空气对照组可见血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)阳性表达于皮质、海马和皮质下结构。其中在皮层、海马区为弱阳性，在皮质下区为强阳性表达，阳性着染细胞为神经元，表达于核周胞浆和主树突，胞核为阴性表达。在脉络丛的血管内皮细胞为阳性表达，胞浆着染，胞核为阴性。空气对照组VEGF表达明显高于高氧对照组，且随时间延长差异增大，至7d时差异有统计学意义(尺0．01)。高氧对照组与药物干预组相比，药物干预组VEGF表达高于高氧对照组，以丹参预防组7d

6、表达最多(尺0．05)，其次是丹参治疗组14d(尺0．05)和SOD治疗组14d(尺O．05)，其他组间比较差异均无统计学意义。4、凋亡指数高氧对照组脑神经细胞凋亡指数明显高于相对应的空气对照组(尺O．01)。3d、7d时凋亡细胞主要集中在大脑皮层，吸氧时间达14d时，病变开始累及海马区、齿状回。用药组凋亡指数与高氧对照组相比均明显下降且差异显著(P(O．01)，按凋亡指数由高到低的排列顺序为SOD预防7d组>丹参预防7d组；14d组中凋亡指数的排列顺序是丹参预防14d组>SOD预防14d组>SOD治疗14d组>丹参治疗14d组，与VEGF表达的高低顺序刚好相反。5、VE

7、GF表达情况与凋亡指数问关系将参与本次实验的所有药物干预组和7d、14d的高氧对照组大鼠共77只(即不包括所有的空气对照组和3d的高氧对照组)，分别按VEGF表达阳性(39只)和阴性(38只)分为二组来统计凋亡指数，可以看出VEGF表达阳性组凋亡指数为16．79±12．13(％)较低，VEGF表达阴性组凋亡指数为39．39±20．09(％)则较高，且差异有统计学意义(尺O．01)。结论l、持续吸入高氧(>／90％02)3～7d后大鼠生存率、体重有所下降，脑湿重／干重比值和脑神经细胞凋亡指数显著上升，提示高氧可以造成新生鼠脑损伤