hgf对高氧致新生大鼠慢性肺疾病的保护作用及其机制的研究

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1、博士学位论文中文摘要摘要随着围生医学的发展，机械通气技术不断完善以及肺表面活性物质的应用，早产儿尤其是极低出生体重儿的存活率不断提高，但同时也伴随慢性肺疾病(chroniclungdisease，CLD)发病率的逐年上升。CLD严重影响早产儿的生活质量，是新生儿致残的主要疾病之一，虽然近年的研究对CLD病理特征有了深一步的认识——以往认为是严重的气道损伤、肺泡过度充气和肺纤维化，目前认为其病理特征主要是肺泡变大且结构简单化、肺泡数目减少、毛细血管结构异常等发育不良的表现。但CLD发病机制目前仍然未完全阐明，因而缺乏有效治疗措施，是目

2、前新生儿疾病研究的热点和难点。CLD的发生可能是多种因素引起的未成熟肺的反应性损伤，其中吸入高浓度氧气(高氧)是引起早产儿CLD损伤的主要原因之一。目前研究已经肯定高氧引起肺泡II型上皮细胞(AECII)凋亡的始动因子是活性氧簇ROS，而AECII的增殖、移行及向肺泡I型上皮细胞(AECI)转化在高氧肺损伤修护过程中起着关键作用。而且AECII凋亡及增殖异常可能是高浓度氧在肺发育关键阶段引起肺的生长和重塑异常的重要因素。因而，我们推测采取一定措施防止高氧肺损伤时AECⅡ的凋亡，增加AECII增殖、移行及向AECI转化诱导肺血管发生可

3、能有助于防治早产儿CLD。肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)是一种多功能细胞因子。研究发现HGF能促进肺发育；促进肺损伤后肺上皮细胞增博士学位论文中文摘要殖修复；预防或治疗肺纤维化；诱导肺血管发生；抑制缺血一再灌注诱导的肺内皮细胞凋亡，有助于肺损伤后修复。本课题以新生鼠及早产鼠为研究对象，更接近I临床实际，并同时进行了在体及离体水平的研究，从以下几方面阐明HGF对高氧致早产儿CLD保护作用及机制。第一部分持续高氧暴露对新生大鼠肺组织病理、氧化、细胞凋亡以及HGF表达的动态影响及其相互关系第一章持续

4、高浓度氧对新生大鼠肺病理组织学及氧化的动态影响目的：观察持续吸入高浓度氧(高氧)对新生大鼠发育中肺的病理及肺组织内脂质过氧化物变化，来探讨高氧对新生鼠肺发育的影响。同时制备出新生鼠高氧致CLD模型。方法：新生SD大鼠生后12小时内分别于90％以上氧(Ho组)和空气中(Air组)持续暴露，于3、7、14、21d，动态观察肺组织病理学改变和胶原染色面积的变化以及肺组织8．异前列腺素F2a(8-iso-PGF2a)含量。结果：与Air组比较，HO组肺泡发育受阻，表现为肺泡变大且结构简单化、肺泡数目减少、等肺泡发育不良的慢性肺疾病(CLD)

5、病理表现，肺损伤逐渐加重，最终纤维化；胶原染色阳性面积7d时高于Air组，随时间延长而逐渐增加；8-iso-PGF2a含量3d时开始升高，Ⅱ博士学位论文中文摘要7d时达最高，以后下降但至21d仍高于空气对照组。结论：1．高氧致新生鼠CLD的主要病理变化是肺泡发育障碍。2．氧自由基可能参与了CLD的发病过程。关键词：高浓度氧，慢性肺疾病，肺组织病理，8异前列腺素，新生大鼠第二章HGF在持续高氧暴露新生大鼠肺组织中的动态表达及其与细胞凋亡的关系目的：动态观察高浓度氧(高氧)暴露新生鼠肺组织细胞凋亡情况、肝细胞生长因子(HGF)和其受体c

6、Met的表达变化以及两者之间的相关关系，探讨HGF在新生鼠CLD发病中的作用。方法：新生SD大鼠出生后随机分为Air组和HO组(90％氧气)，分别于生后3、7、14、21d留取肺组织标本。以TUNEL观察细胞凋亡变化，透射电镜观察肺泡II型细胞的超微结构变化，免疫组化方法检测HGF、cMet蛋白表达，RT-PCR检测HGF、cMetmRNA表达。结果：3d时，HO组与Air组凋亡细胞数没有差异，7d起HO组高于Air组，并随着吸氧时间的延长凋亡细胞逐渐增加，21d达高峰。Air组AECII表面微绒毛(microvilli，Mv)完整

7、，胞浆内可见线粒体(mitochondria,Mi)和板层小体(1amellarbodies，LB)质膜连续Ill博士学何论文中文摘要完整，气血屏障正常完整，肺问质内无胶原沉积。HO组3d开始出现板层小体排空；7d除线粒体和板层小体改变外，出现凋亡的特征性改变，即：微绒毛减少，染色质浓缩，沿着核膜排列，形成不同形状和大小的块状。14d上述变化明显加重，线粒体嵴断裂，部分融解，板层小体基本排空，伴有气血屏障明显增厚；至21d时细胞核固缩、融解，板层小体彻底排空线粒体、微绒毛消失，肺间质有大量纤维组织增生。HGF蛋白主要在正常肺组织间质

8、细胞中和支气管上皮细胞中表达，cMet蛋白主要在正常肺组织肺泡和支气管上皮细胞中表达。高氧暴露3d时，两组HGF、cMetmRNA及蛋白表达未见明显差异，7d，14d，21d时，HO组HGF、cMetmRNA及蛋白表达随着吸氧时间的延