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1、西地那非对高氧所致肺损伤模型新生鼠的保护作用【摘要】目的：观察西地那非对高浓度氧暴露后新生大鼠肺组织形态学改变的影响,并探讨其机制。方法：80只足月新生SD大鼠随机分为空气加生理盐水对照(A)组、空气加西地那非(B)组、高氧加生理盐水对照(C)组和高氧加西地那非治疗(D)组4组。C、D组输入高体积分数氧(FiO20.85),B、D组每天予西地那非100mg·kg－1背部皮下注射。在实验第14天观察肺组织病理改变、放射状肺泡计数(RAC),并且用免疫组化法测定肺组织内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白水平。结果：D组肺组织病理改变减轻,RAC和肺微血管数目高于C组(7.
2、340±0.620vs5.013±0.738，P＜0.001；3.855±0.717vs2.375±0.705，P＜0.001)，且B、D两组肺组织eNOS表达明显增加(均P＜0.001)。结论：西地那非对高氧所致肺损伤具有一定的保护作用，其机制可能与西地那非降低肺内血管压力及促进肺微血管生成并增加eNOS的表达有关。【关键词】西地那非；高压氧；肺；新生大鼠氧疗是儿科常用的治疗措施,可提高动脉血氧分压,改善组织缺氧。但在肺发育不成熟的早产儿中,长时间高浓度的氧疗易造成肺损伤,甚至导致患儿病死率增加,其中常见的慢性肺部疾病支气管肺发育不良(bronchopulmona
3、rydysplasia,BPD)即与氧疗密切相关。该病以肺发育停滞为主要病理表现，但其发病机制尚未完全阐明,治疗也在探索中。西地那非为5′-磷酸二酯酶选择性抑制剂，临床主要用于治疗勃起功能不良及中重度肺动脉高压。有研究表明［1］，在婴幼儿肺动脉高压动物模型中,西地那非能高选择性地扩张血管,降低肺血管阻力,从而有效地降低肺动脉压力,增加心输出量。由于对这些新功能的认识,临床上对西地那非的新用途产生了浓厚的兴趣。本实验予足月新生Sprague-Dag·kg-1，A、C组接受等量生理盐水。1.2.2实验标本的采集及检测方法1.2.2.1标本采集、制作每组分别于实验第14天
4、腹腔注射10%水合氯醛3ml·kg-1麻醉后摘眼球放血随机处死,将右肺上两叶置于40g·L-1中性甲醛中固定,4℃过夜,石蜡包埋,制作5μm组织切片,用于肺形态学观察。1.2.2.2肺组织CD31和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）免疫组化检测石蜡切片常规脱蜡至水,30g·L-1过氧化氢室温处理10min，抗原修复，血清封闭，滴加一抗CD31(稀释1∶75)或eNOS(稀释1∶250),37℃孵育2h，滴加生物素标记二抗,37℃孵育30min，加辣根酶标记的链霉卵白素,37℃孵育30min，DAB显色。用已知阳性片作为阳性对照,PBS液代替一抗为阴性对照。采用MetaM
5、orph图像分析软件,以平均积分光密度值表示eNOS阳性染色的强度,其与染色程度呈正相关,进行肺组织eNOS蛋白表达的半定量。1.2.2.3肺形态学观察每只动物随机抽取切片5张,每张切片于光镜下随机选取5个视野。(1)组织切片行HE染色后光镜观察。(2)HE染色切片,从呼气性细支气管中心至远端胸膜引一垂直线,计数该直线上肺泡数量即为RAC。每张切片10次计数,取平均值。(3)光镜(×100)下计数阳性染色的微血管数目（CD31为血管内皮特异标志,可反映毛细血管数目及形态的改变）。1.3统计学处理应用SPSS13.0软件进行处理,数据均以x-±s表示。各组间采用One
6、-WayANOVA检验,两两比较采用SNK(q)检验。2结果2.1大体观察A、B组大鼠两肺呈粉红色,质软且弹性较好；C组两肺较苍白,部分肺叶呈暗红色，可见点状出血灶；D组双肺多数呈粉红色，偶呈暗红色，可见少量点状出血灶。A～D依次为A～D组图1各组新生大鼠肺组织学改变HE×2002.3各组RAC、微血管计数和eNOS蛋白表达的变化eNOS染色阳性信号均为棕黄色颗粒,定位于胞浆；阴性对照无阳性染色。eNOS在各组均主要分布于气道上皮细胞及血管内皮细胞,其中C、D组肺泡巨噬细胞也有阳性表达,中性粒细胞无阳性染色。14d时C组表达强度较A组明显升高(P<0.01),
7、D组表达强度较C组明显升高(P<0.01)。见图2、表1。表1各组新生大鼠RAC、微血管计数和eNOS表达的变化注：F(RAC)=252.179；F(微血管计数)=108.263；F(eNOS)=42.313讨论BPD是多种病因共同作用的结果，其中发育不成熟与BPD发生的相关性最大［4］。由于产前糖皮质激素、表面活性物质的使用和机械通气技术的改进，导致BPD的表现和以前刚提出来时有了很大的不同，其病理特点已由过去严重的呼吸道损伤、局灶性肺过度膨胀和间质纤维化转变为以肺泡结构简化和血管生长异常为特征的肺发育阻滞［5］。因此，促进肺微血管的生长是否能够预防和改
