高效液相色谱法测定注射用辛芍中甘露醇含量

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1、高效液相色谱法测定注射用辛芍中甘露醇含量1材料与方法1.1试药甘露醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号100534200301），乙腈（色谱纯）、重蒸水。注射用辛芍冻干粉针（贵阳医学院药物研究所，批号20040510，20040518，20040520）。1.2仪器LC-10Avp高效液相色谱仪系列（岛津公司），含2台LC10ATvp输液泵，岛津RID-6A示差折光检测器，7725i手动进样阀。L色谱工作站（广西威玛龙色谱科技公司）。1.3色谱条件参考文献[3～6]，采用LichromsobNH2色谱柱（4.6mm×2

2、50mm，5μm），乙腈水（82∶18）为流动相，流速为1ml/min，柱温为40℃。试验条件下各组分分离良好，理论塔板数按甘露醇峰计为4300，阴性对照品溶液无干扰（图1）。图1注射用辛芍供试品高效液相色谱结果Fig.1HPLCchromatogramsofXinshaofreezedriedinjectionsample1.4溶液的制备1.4.1对照品溶液制备精密称取甘露醇对照品200.5mg，置25ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。1.4.2供试品溶液制备取供试品400mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解

3、并稀释至刻度，摇匀，即得。1.4.3阴性对照品溶液的制备按注射用辛芍（冻干粉针）处方制备不含甘露醇的阴性对照品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。2结果2.1线性关系考察精密吸取已制备好的对照品溶液1.5、2、2.5、3、3.5ml于5个10ml容量瓶中，分别加水稀释至刻度，摇匀，制得每1ml分别含1.203、1.604、2.005、2.406、2.807mg的系列对照品工作液。分别精密吸取上述系列对照品工作液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积(A)为纵坐标，进样浓度C（g/L）为横坐标，绘制工作曲线，用

4、最小二乘法进行线性回归计算，得回归方程为A=446501C12029，r=0.9999，表明甘露醇进样浓度在1.2～2.8g/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.3稳定性试验取同一批号供试品，按1.4.2项下方法制备供试品溶液1份，分别于0、2、4、6、8h进样，结果平均峰面积为884602，RSD为1.2%，供试品溶液在8h内稳定。2.4回收率试验采用加样回收率试验，精密称取已测定甘露醇含量的成品（含量5.041%）适量，精密加入甘露醇，按供试品溶液制备方法制备供试液，测定，甘露醇平均回收率为99.54%，RSD为2.4

5、%，见表1。表1回收率试验结果2.5样品测定　　取成品制剂，按供试品溶液的制定方法制备供试品溶液及对照品溶液，分别进样20μl，记录色谱，测定峰面积，计算甘露醇含量，3批样品测定结果为9.85mg/支，10.2mg/支，10.7mg/支。3讨论实验采用的甘露醇含量测定方法是根据中国药典2005版一部附录《中药质量标准分析方法验证指导原则》要求，通过对方法的专属性、线性、精密度（重复性、中间精密度）、准确度等试验考察,较原《中药新药质量标准研究的技术要求》对含量测定方法学考察更为全面。在系统适用性试验中，甘露醇的保留时间约为16

6、.5min，阴性对照在甘露醇出峰位置处无干扰杂质峰，供试品中甘露醇与杂质峰分离度大于1.5，理论塔板数以甘露醇峰计算为4300，故规定理论板数以甘露醇峰计算应不低于3500。在线性关系考察试验中，拟合为过原点的方程为Y=440947X，分别将最小进样浓度和最大进样浓度所得的峰面积代入公式计算甘露醇含量，结果相对偏差分别为0.6%和0.4%，说明该工作曲线几乎过原点，故采用外标一点法计算。【参考文献】[1]王永林，黄勇，郑林，等.注射用辛芍冻干粉针药味配伍作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2007(7):38-40.[2]黄勇

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