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1、升麻炮制前后有效成分的比较研究周保琪2009级中药传承班河南中医学院河南郑州450008[摘要]目的:建立测定升麻中有效成分阿魏酸和异阿魏酸含量的方法,并比较炮制前后阿魏酸、异阿魏酸和272脱氧升麻亭的含量差异。方法:阿魏酸和异阿魏酸测定方法:色谱柱为YMC2PackODS2C18柱(4.6mm×150mm,5μm),乙腈2水2乙酸(15∶85∶0.25)为流动相,流速0.6mL/min,柱温26°C,紫外检测波长320nm;272脱氧升麻亭测定方法:色谱柱为YMC2PackODS2C18柱(4.6mm×150
2、mm,5μm),乙腈2水2乙酸(40∶60∶1)为流动相,流速0.6mL/min,柱温26°C,示差检测器。结果:测定阿魏酸线性范围(r),加样回收率为(RSD);异阿魏酸线性范围(r),加样回收率为(RSD)。结论该方法简便、快捷、准确,重复性好,适合于升麻药材和饮片的质量控制。[关键词]升麻;阿魏酸;异阿魏酸;272脱氧升麻亭;炮制升麻为常用中药,具有发表透疹、清热解毒、升举阳气等功能,2010年版《中国药典》收载其原植物有大三叶升麻CimicifugaheracleifoliaKom.、兴安升麻C.dah
3、uricaMaxim.和升麻C.foetidaL.3种。升麻根茎主要含三萜皂苷、有机酸和色原酮类化合物。一般认为升麻有机酸是其有效成分,并以所含的阿魏酸、异阿魏酸为指标控制质量[1～4]。近年来研究发现升麻所含的环菠萝蜜烷型三萜皂苷具有抗肿瘤、抑制核苷运转、调节内分泌等多种生理活性,也是其活性成分之一。升麻的临床应用以生片和蜜制片为主,有关升麻炮制研究非常少,本实验将以RP2HPLC法对升麻炮制前后有效成分阿魏酸、异阿魏酸和三萜皂苷272脱氧升麻亭(272deoxyactein)的含量进行测定,并探讨升麻炮制前
4、后有效成分变化规律。1 升麻炮制前后阿魏酸和异阿魏酸的含量测定1.1 仪器与试药日本Jasco系列HPLC色谱仪:Jascopump21580,JascoUV21575检测器,Jasco工作站;湘仪天平厂生产TG332A微量分析天平,昆山市超声仪器有限公司生产KQ2250B型超声波振动仪。乙腈色谱纯(Fisher公司出品),重蒸馏水自制,阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号077329910),异阿魏酸和272脱氧升麻亭为本课题组分离和结构鉴定,经HPLC法检测含量达98。1.2 实验方法1.2.1
5、色谱条件色谱柱为YMC2PackODS2C18柱(4.6mm×150mm,5μm);乙腈2水2乙酸(15∶85∶0.25)为流动相,流速0.6mL/min,柱温26°C,紫外检测波长320nm,进样量20μL,外标法定量。理论塔板数按阿酸峰计算,应不低于4000。1.2.2 溶液制备对照品溶液制备 准确称取干燥至恒重的对照品阿魏酸2.12mg置2mL量瓶中,用80甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即得1.06mg/mL阿魏酸贮备溶液;另再准确称取干燥至恒重的对照品异阿魏酸2.08mg置2mL量瓶中,用80甲醇溶解并稀释
6、至刻度,摇匀即得1.04mg/mL异阿魏酸贮备溶液。供试品溶液的制备 精密称取干燥的升麻样品粉末0.5g,置三角瓶中,加入50mL甲醇,摇匀,于80°C水浴上回流提取40min,过滤,滤渣用20mL甲醇洗涤3次,合并滤液,回收甲醇,提取物用80甲醇定容至2mL量瓶,摇匀,即得。1.2.3 测定法精密吸取阿魏酸和异阿魏酸贮备液80μL和160μL置2mL量瓶,用80甲醇定容至刻度,即为阿魏酸和异阿魏酸稀释溶液。用微量进样器精密吸取供试品溶液和对照品稀释溶液各20μL注入HPLC仪,外标法定量，得到对照品、样品HP
7、LC色谱图,测定结果见表1。表1 升麻炮制前后有效成分含量测定药名产地类别阿魏酸含量异阿魏酸含量27脱氧升麻亭含量（㎎／g）(㎎／g）(㎎／g）升甘肃生药切片蜜制片麻四川开源生药切片蜜制片兴安升麻炮制前后有效成分含量测定药名产地类别阿魏酸含量异阿魏酸含量27脱氧升麻亭含量（㎎／g）(㎎／g）(㎎／g）兴内蒙生药安切片升蜜制片麻牡丹江生药切片蜜制片河北承德生药切片蜜制片1.3 方法学考察1.3.1 稳定性试验取同一供试品溶液按上述色谱条件分别于0,1,2,4,6,10h进样测定,预测结果表明含量在10h内基本不变
8、。1.3.2 线性关系考察分别精密吸取阿魏酸贮备溶液20,40,80,120,160μL置1mL量瓶,加80甲醇稀释至刻度,按上述色谱条件进行HPLC分析。以峰面积对进样量进行回归处理,得阿魏酸线性回归方程,r,线性范围;另精密吸取异阿魏酸贮备液20,40,60,80,100μL置1mL量瓶,加80甲醇稀释至刻度,按上述色谱条件进行HPLC分析。以峰面积对进样量进行回归处理,得异阿魏酸
