实时荧光定量pcr检测乳腺癌相关基因brca1突变的研究

《实时荧光定量pcr检测乳腺癌相关基因brca1突变的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、实时荧光定量PCR检测乳腺癌相关基因BRCA1突变的研究李玉林基金项目：河南省科技攻关项目（122102313101）作者简介：李玉林（1979-），男，河南洛阳人，高级工程师，主要从事生物工程技术研究*通信作者：王云龙，（1962-）男，教授，研究方向：生物制药；E-mail：biowyl@126.com、王云龙1,2*、邓黎黎1、陈冠男1（1、河南省生物工程技术研究中心，河南郑州450001；2、郑州职业技术学院，河南郑州450121）【摘要】目的乳腺癌易感基因BRCA1是与乳腺癌相关的重要抑癌基因，应用实时荧光定量PCR技术检测BRCA1基因的突变对于乳腺癌的筛

2、查、监测以及治疗都具有指导性意义。方法本研究应用实时荧光定量PCR技术，对31例散发性乳腺癌患者进行了BRCA1基因突变检测。结果所有样本在检测位点5589del8和1100delAT均呈阳性结果，出现明显的扩增曲线。结论证明实时荧光定量PCR技术能够适用于乳腺癌易感基因BRCA1突变的筛查。【关键词】乳腺癌易感基因；实时荧光定量PCR；突变DevelopmentofRealtimePCRAssayforBreastCancerSusceptibilityGeneBRCA1MutationDetectionLIYu-lin1,WANGYun-long1,2*，DENG

3、Li-li1，CHENGuan-nan1(1.HenanBiotechnologyResearchCenter,Zhengzhou,Henan,450001;2.ZhengzhouTechnicalCollege,Zhengzhou450121)[Abstract]ObjectiveThebreastcancersusceptibilitygene,BRCA1isanimportantanti-oncogene.DevelopmentofrealtimePCRassayforthedetectionofBRCA1genemutationshasgoodguidance

4、forscreen,surveillanceandclinicaltreatmentofbreastcancer.MethodsInthepresentstudy,realtimePCRwasusedtodetectBRCA1genemutationsofsporadicbreastcancerpatients.ResultsOurresultsindicatedthatallsampleswerepositiveinthemutationsitesof5589del8and1100delAT.ConclusionItwasconcludedthatrealtimeP

5、CRwasapplicabletothescreenandmonitoringofBRCA1mutants.[Keywords]BRCA;realtimePCR;mutation乳腺癌是严重危害女性健康的高发恶性肿瘤，近年来，其发病率在我国逐年上升并呈年轻化趋势。虽然乳腺癌有比较好的预后，但其仍居女性癌症死亡原因之首[1]。乳腺癌的发病机制目前尚不清楚，不过大量的研究已经证实该疾病与雌激素、多种癌基因、抑癌基因相关。其中，5％～10％的乳腺癌和遗传易感性相关，是由于基因突变而引起的，其中肿瘤抑制基因BRCA1和乳腺癌发病的关系较为密切，属于较为公认的乳腺癌易感基因(b

6、reastcancersusceptibilitygene)，该基因于1994年由Miki首先分离克隆出来，定位于染色体17q21，全长约100kb，编码区约55.5kb，含有22个编码蛋白的外显子和2个非编码外显子，基因编码产物为含1863个氨基酸的蛋白。其蛋白的氨基末端含有一锌指结构域，羧基末端含有两个高度保守的BRCA1C末端功能区[2]。BRCA1基因组发生突变的位点非常多，不同地区不同种族的人群其BRCA1基因突变情况差异很大，在国内大陆地区，相关研究显示国内家族性乳腺癌患者BRCA1基因突变率最高的是5589del8、1100delAT（复旦大学癌症研究中

7、心），因此本研究选取此两处突变位点作为检测靶点，应用实时荧光定量PCR技术检测了31例经病理学确诊的散发性乳腺癌患者的基因突变情况。1材料和方法1.1标本来源和采集：总共收集31例散发性乳腺癌患者的血液标本。所有患者均经病理诊断确诊为乳腺癌，并且尚未接受化疗或放疗，患者年龄40岁~60岁，平均53岁，均为女性，直系亲属及其家族成员中无家族性乳腺癌病史。标本采集过程为直接抽取患者外周静脉血5ml，加入ACD抗凝，直接提取DNA或于-70℃保存备用。1.2试剂和仪器：所需试剂包括：10%SDS，PBS缓冲液，1MEDTA，3M乙酸钠，1MTris碱，蛋白