实时荧光定量rtpcr检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究

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1、实时荧光定量RTPCR检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究翟晓晓，刘腾飞，姚开泰【摘要】目的研究CXCR4、CTGF、MMP1、IL11、MST1R、ETV16种基因在鼻咽癌细胞58F与骨共培养前后的表达情况，分析这些基因在鼻咽癌骨转移中的作用。方法采用基于SYBRGREENⅠ法的实时荧光定量RTPCR检测58F细胞与骨共培养前后骨转移相关基因的表达情况。结果58F细胞与骨共培养后CXCR4、CTGF、MST1R、ETV1的表达水平较共培养前差异有显著性(P0.05)，均表达上调；MMP1、IL11则差异无显著性。结论实时荧光定量RTPCR能够敏感、特异地检测出鼻咽癌细

2、胞在与骨组织共培养前后的mRNA的表达变化，方法准确可靠，操作方便；CXCR4、CTGF、MST1R、ETV1有可能成为判断鼻咽癌骨转移的潜在标志物。【关键词】实时荧光定量RTPCR；骨转移相关基因；鼻咽癌　　Abstract:ObjectiveToparetheexpressionsofCXCR4,CTGF,MMP1,IL11,MST1R,andETV1mRNAinNPCcellline58Fand58FcoculturedRNAexpressionlevelsandthebonemetastasisofNPC.MethodsThemRNAexpressionsofsixg

3、enesinNPCcellline58Fand58FcoculturedeFluorescentQuantitativeRTPCR.ResultsTheexpressionsofCXCR4,CTGF,MST1RandETV1aybeusedasapotentialmoleculartargetsforthediagnosisofbonemetastasisinNPC.　　KeyefluorescentquantitativeRTPCR;bonemetastasisgene;nasopharyngealcarcinoma　　骨转移是晚期恶性肿瘤的常见并发症，近年来逐渐成为肿瘤转移机

4、制研究领域的热点之一，在骨转移的发生过程中，由于骨组织微环境与肿瘤细胞的相互作用，使得肿瘤细胞具有特定的基因型。研究发现〔1〕：趋化因子受体4（chemokinereceptor4，CXCR4）、结缔组织生长因子(connectivetissuegroatrixmetalloprotease1,MMP1)、白细胞介素11（interleukin11）是乳腺癌骨转移的标签基因；巨噬细胞刺激蛋白受体（macrophagestimulating1receptor,MST1R)在乳腺癌骨转移中发挥作用〔2〕;而ETV1(ETSvariantgene1)则在前列腺癌的骨转移中表达增高〔3〕。

5、　　鼻咽癌作为我国南方常见的上皮性恶性肿瘤，远处转移以骨最为常见，本研究选取较常规RTPCR更好的实时荧光定量RTPCR（realtimefluorescencequantitativePCR，FQPCR）技术对目的基因在鼻咽癌细胞株与骨共培养前后的表达情况进行研究，以探讨上述6个基因在鼻咽癌骨转移中的作用。　　1材料与方法　　1.1细胞　　鼻咽癌细胞株58F为本实验室冻存，低分化人鼻咽癌细胞株，细胞均呈上皮样，贴壁生长，生长培基为含有10％(φ)新生牛血清的RPMI1640。　　1.2实验动物　　6～8周龄BALB/c裸鼠，SPF级，合格证号：SCXK（粤）2006-001520

6、06B0232006A048，体质量16～20g，雌雄不限，购自南方医科大学实验动物中心。　　1.3主要试剂和仪器　　BGJb培养基购自Invitrogen公司，RPMI1640购自Hyclone公司，胎牛血清购自杭州四季青，Trizol试剂购自Invitrogen公司，Stratagene公司的Mx3000PRealTimePCR扩增仪，PrimeScriptTMRTPCR试剂盒以及SYBRPremixExTaqTM试剂盒购自Takara。　　1.4共培养实验　　从裸鼠取前肢骨和后肢骨（包括大腿骨、胫骨、肱骨和桡骨），去除骨周围的肌肉，沿长轴切开骨干，使骨髓腔暴露，切成0.8cm长的骨

7、块置于含有抗生素的BGJb培养基中，37℃平衡24h后，将3～5块骨组织加入到生长有58F细胞的T25培养瓶中，与58F细胞进行共培养，培养基为含抗生素和5％胎牛血清的BGJb和RPMI1640（体积比1∶1）混合培养基，连续培养24h。　　1.5引物设计　　所有引物（见表1）均用引物设计软件PrimerPrimer5.0设计，由上海英俊公司合成。　　表1CXCR4、CTGF、MMP1、IL11、M