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1、药物分析论文题目：电泳技术在药物分析中的应用专业：生物技术学号：060552203姓名:郭勤电泳技术在药物分析中的应用摘要:本文概述了电泳技术产生的背景以及发展历程,简要介绍了几种常用的电泳技术的原理、特点以及在药物分析中的应用,尤其是高效毛细管电泳法在许多科学试验中被广泛应用并取得了卓越的成效。关键词 电泳;电泳技术;高效毛细管电泳电泳(electrophoresis)是指带电质点在电场作用下向异电荷电极移动。早在1808年俄国的物理学家Pence首先发现了电泳现象,1937年瑞典科学家Tise
2、lius设计世界上第一台电泳仪,建立了“移界电泳法(movingboundaryEP)”,用于研究蛋白质的分离,开创了电泳技术的新纪元。而今电泳技术已成为国内外生物学、分子生物学、生物工程学中不可缺少的分离分析手段之一,是生化药物生产、分析中不可缺少的分析工具。尤其是高效毛细管电泳(HPCE)在分离分析酶、蛋白质、多肽、核酸等大分子方面具有高分辨率、高灵敏度,分析时间短,用量少等特点,是十分理想的分离手段。英国药典从1975年版开始将电泳收载入附录[1],1980版[2]、1988版[3]、199
3、3版[4]将电泳方法增加到6种,1998年版又对自由移动界面电泳作了详细说明[5]。美国药典从1985版[6]起也开始将电泳收载入附录,并对凝胶电泳的原理、影响因素作了详细的说明,NF22册又增加了DESK电泳[7]。中国药典1990年版二部首次将电泳作为法定的、通用的检测方法收载入附录中[8]、1995年版[9]、2000年版[10]将电泳中的五种电泳技术(纸电泳法、醋酸纤维素薄膜电泳法、琼脂糖凝胶电泳法,聚丙烯酰胺凝胶电泳法、SDS2聚丙烯酰胺凝胶电泳法)在附录中规定下来,并对高效毛细管电泳也
4、作了详细的说明。现将目前常用的几种电泳技术作简要说明(具体装置和操作方法中国药典已作明确说明)。1 纸电泳法(paperelectrophoresis)纸电泳法是20世纪50年代发展起来的一种电泳技术,是用滤纸作为电泳支持介质的一种方法。纸电泳法的设备简单,应用广泛,是最早使用的一种电泳技术也是一种通用的分离、分析手段,在早期的生物化学研究中,纸电泳曾发挥重要作用,但由于纸电泳时间长,分辨率较差,近年来已逐渐为其他快速、简便、分辨率高的电泳技术所代替。部颁标准1998年生化药品第一分册中仅有三磷酸
5、腺苷二钠、三磷酸腺苷二钠注射液的含量的测定用的是纸电泳法[11],胞磷胆碱钠有关物质检查也采用此法[12]。此外,其也在植物化学成份的分离中得以应用,如糖类,三萜类等可利用其衍生物的方法使其分子带电荷,再用纸电泳法进行分离。2 醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳法也是20世纪50年代发展起来的一种电泳技术,是用醋酸纤维素薄膜作为电泳支持介质的一种方法。具有以下优点:①电泳后区带界限清晰,分辨力比纸电泳要强得多;②通电时间较短(20min～1h);③它对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸
6、酶)都几乎完全不吸附,因此无拖尾现象;④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品处几乎完全无色。它的电渗作用虽高但很均一,不影响样品的分离效果,由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低,因此必需在密闭的容器中进行电泳,并使用较低压电流避免蒸发。目前醋酸纤维素薄膜电泳已经广泛用于血清蛋白,血红蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋白,甲胎蛋白,类固醇及同工酶等的分离分析以及免疫电泳等中,尽管它的分辨力比聚丙烯酰胺凝胶电泳低,但它具有简单,快速等优点。中国药典1995年版人血白蛋白,人血丙种球蛋白、人胎盘蛋白、人
7、胎盘血丙种球蛋白质中的蛋白质纯度测定采用的就是此法[13]。中国药典2000年版二部中人乙型肝炎免疫球蛋白、人狂犬病免疫球蛋白、人破伤风免疫球蛋白的鉴别就用免疫电泳法测定[14]。所以现在趋向用醋酸纤维薄膜电泳法代替纸电泳法。3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)聚丙烯酰胺凝胶电泳是20世纪60年代发展起来的一种电泳技术,是根据被分离物质所带的电荷多少及其分子大小、形状的不同,在电场的作用下,产生不同的移动速度而分离的方法。它具有电泳和
8、分子筛的双重作用。此法重复性高,凝胶柱弹性好,无电渗作用,且设备简单,样品量少,分辨率高,广泛用于分离蛋白质及较小分子的核酸,且能测定蛋白质、酶和核酸的分子量。如血浆脂蛋白目前常用的一种含量测定方法用的就是聚丙烯酰胺凝胶电泳法。中国药典2000年版二部中胰岛素及中性胰岛素注射液的有关蛋白质检查用的也是此法[15]。此外,8%聚丙烯酰胺凝胶电泳还用于性别基因鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳法目前还广泛应用于分子生物学、生物化学、细胞学、微生物学、植物学、动物学、免疫学等学科的研究以及临床化验
