自噬对早期氧糖剥夺模型下神经凋亡的影响

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1、自噬对早期氧糖剥夺模型下神经凋亡的影响周迎，段满林*周迎，221002，徐州，徐州医学院麻醉学院，E-mail：jesson1020@163.com*通讯作者：段满林，210002，南京，南京军区南京总医院麻醉科，E-mail：dml9001@163.comAutophagyeffectsapoptosisofneuronsunderearlyoxygen-glucosedeprivationZHOUYing，DuanMan-linZHOUYing,Xuzhou221002,DepartmentofAnesthesiol

2、ogy,XuzhouMedicalCollege,E-mail：jesson1020@163.comCorrespondingauthor:DuanMan-lin,Nanjing210002,DepartmentofAnesthesiology,GeneralHospitalofNanjingMilitaryRegion,E-mail：dml9001@163.com自噬对早期氧糖剥夺模型下神经凋亡的影响【摘要】目的研究在氧糖剥夺的情况下体外培养的皮层神经元中自噬的表达，并探讨自噬在脑缺血缺氧损伤中的作用及相关分子机制。方

3、法原代神经元培养8-10天，用OGD(oxygenglucosedeprivation)法建立小鼠皮层神经元体外缺血模型，用CCK-8法和WesternBlot法分别检测各OGD时间点神经元的存活率和凋亡相关蛋白Caspase3的表达，WesternBlot法检测自噬相关蛋白LC3B的表达，给予自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤，运用Westernblot技术检测二者对Caspase3表达的影响。结果利用OGD法成功建立了小鼠皮层神经元体外缺血模型；CCK-8法结果证实了氧糖剥夺(OGD)处理对于神经元的损伤呈

4、现一定的时间相关性；WesternBlot显示，LC3B在OGD处理后立即上升，在1h达到峰值(P<0.05)，2h又开始下降；用雷帕霉素处理后，抑制了Caspase3的活化，减少神经元的凋亡(1h)，而用3-MA处理后活化了caspase3，从而增加了神经元凋亡。结论缺血缺氧早期自噬抑制神经元凋亡。关键字：自噬；脑缺血缺氧；OGD；凋亡Autophagyeffectsapoptosisofneuronsunderearlyoxygen-glucosedeprivation【Abstract】ObjectiveTostu

5、dytheexpressionofautophagyinprimaryculturedcorticalneuronsdeprivedofoxygenandglucose,andexploreitspossiblefunctionandmolecularmechanismaftercerebralischemiainrats.MethodsAfterprimarycorticalneuronswascultured8-10days,themodelofoxygen-glucosedeprivation(OGD)injury

6、wasestablished.Neuronviabilityandapoptosisrate(Caspase3)wereevaluatedbyCCK-8assayandWesternblotindifferenttimeperiodsafterOGDtreatment.TheexpressionofspecificproteinofautophagyLC3BinOGDgroupsweredetectedbyWesternblot.Primaryneuronspretreatedwiththeinhibitorofauto

7、phagy3-Methyladenine(3-MA)andtheinducerofautophagyRapamycin,WesternblotassaywasusedtoevaluatetheexpressionofCaspase3.ResultsWehavesuccessfullyestablishedtheprimarycorticalneuronischemiamodelbyoxygen-glucosedeprivation.ResultsofCCK-8assayconfirmeddamageofneuronagg

8、ravatedinOGDtime-dependence.TheexpressionofproteinLC3B,whichwerethemarkersforautophagy,wasimmediatelyincreasedafterOGD,peakedat1h(P<0.05)andreducedat2h.Rapamyc