器官型脑片糖氧剥夺模型的建立及nbp对此模型细胞凋亡的影响

《器官型脑片糖氧剥夺模型的建立及nbp对此模型细胞凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文器官型脑片糖氧剥夺模型的建立及NBP对此模型细胞凋亡的影响姓名：郭彦芳申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：董梅201203毒中文摘要器官型脑片糖氧剥夺模型的建立及NBP对此模型细胞凋亡的影响摘要目的：建立大脑皮层器官型脑片的氧糖剥夺模型(OxygenandGlucoseDeprivation，OGD)，并在此基础上观察正丁基苯酞(NBP)对细胞凋亡和线粒体电位的影响。方法：选择出生后5-7天(P5—7)的SD(SpragueDawley)-孚L大鼠，制备大脑皮层运动区的器官型脑片，采用膜插件的方法进行体外培养，观察其形态，并分别于1w，2w，3w，4w时间点进行

2、SMI．32染色，观察其中的锥体细胞发育并进行计数。2周后，随机分为对照组(C组)和实验组(To，To．ol，To．1，Tl，Tlo组)，每组九片，更换含Propidiumiodide(PI，1lag／m1)的培养液，孵育20min，倒置荧光显微镜下拍照(4X，曝光时间1．038ms，灵敏度ISO1600)后T组采用厌氧罐氧剥夺，更换无糖培养液(含PI)的方式，进行OGD干预30min，后依次更换含不同剂量NBP(0，O．01，O．1，1，101xM)的正常糖含量培养液(含PI)，C组与T组同一时间更换正常培养液。分别在干预前和恢复正常条件l小时后，观察PI染色。并根据实验结果，选择To组和

3、Tlo组，分别在不同时间点(OGD30min，NBPlh，24h，72h，7d)同样条件下拍照。另外C组和T组，进行OGD和NBP干预(培养液不添加PI)，于1h进行JC．1线粒体检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化。结果：1脑片在体外培养存活良好，无明显的坏死区域，镜下观察可见脑片体积逐渐增大，变薄，透光度增加，皮层和皮层下结构分界清晰，1、2、3、4周的脑片，进行SMI．32免疫组化染色，可见SMI．32阳性的细胞排列整齐，每个细胞有一个长的顶树突伸向皮层，并维持稳定的数目；2OGD前后PI染色荧光强度值有明显变化，并在恢复正常糖氧供应条件后，仍有持续增强，在72h和7d时的观察值明显的升高

4、，各时间点之间及与正常对照组相比均存在明显差异，差异具有统计学意义(P<0．05)：●中文摘要3器官型脑片OGD30min后，对照组(C组)和实验组(To，To．0l，To．1，Tl，Tlo组)，PI染色可见不同亮度的红色荧光，与正常对照组相比，实验组各亚组的荧光强度均大于对照组，各组红色荧光强度依次增强，与NBP浓度(O．101．tM范围内)呈负相关，实验组与对照组及实验组各亚组之间差异均有统计学显著性(P

5、性差异。To组随时间的延长细胞凋亡明显增加，在72h和7d时的观察值明显的升高。然而NBP组随时间的延长，PI染色逐渐减少，各组之间的差异均具有统计学意义(P

6、具有与体内类似的细胞结构，锥体细胞分布，可以作为研究外界刺激对皮层神经元影响的各种模型制作的平台；3OGD模型操作方便，能够诱导脑片损伤，出现细胞的急性死亡和迟发性凋亡，模拟了缺血性脑损伤的病理变化，重复性良好；4NBP对缺血性脑损伤导致的急性和迟发性细胞凋亡均具有保护作用，且有明显的量效关系，但不能完全阻断这两种凋亡的发生；5脑片损伤后线粒体电位的耗散在早期已经出现，与迟发性细胞凋亡的发生相关，NBP对线粒体电位的耗散有阻止作用，且与NBP浓度存在量效关系。关键词：器官型脑片；OGD；正丁基苯酞；细胞凋亡；PI染色，英文摘要Establishoxygen．glucosedeprivatio

7、nmodeloforganotypicbrainslicesandobservetheeffectofNBPonapoptosisinthemodelABSTRACTObjective：Toestablishtheoxygenandglucosedeprivation(OGD)modeloforganotypicbrainslicesofratcerebralcortexandobservetheeffect