响应面法优化酶法提取鳕鱼皮中胶原蛋白条件

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1、研究报告中国酿造2010年第9期总第222期·83·响应面法优化酶法提取鳕鱼皮中胶原蛋白条件马俪，王晓丹，程贺，赵长新(大连工业大学生物与食品工程学院，辽宁大连l16034)摘要：利用响应分析法考察了酶浓度、酶解反应时间和酶解温度3个因素对提取鳕鱼皮中胶原蛋白提取率的影响。研究发现，胶原蛋白的最佳提取条件为水解时间10．43h、水解温度16．32℃、酶浓度0．054％，提取率27．53％，比单因素试验最高的提取率高22．3％。并通过对所提取的鳕鱼皮的胶原蛋白的SDS．PAGE电泳分析，确定了所提取的蛋白质制品是纯度较高的胶原蛋白，经电泳测定鳕鱼皮胶原蛋白1与d2链的分子量分别为113kD

2、a~D110kDa。关键词：鳕鱼皮；胶原蛋白；响应面分析中图分类号：0658文献标识码：A文章编号：0254—5071(201O)09-0083—03OptimiTationofenzymaticextractionconditionsofskincollagenfromcod(Cr~'usmorrhua)byresponsesurfacemethodMALi，WANGXiaodan，CHENGHe，ZHAOChangxin(SchoolofBiological&FoodEngineering,DalianPolytechnicUniversity,Dalian116034,China)

3、Abslract：Efectsofconcentrationsofenzyme．treatingtimeandtemperatureonrateofextractionofcollagenfromfish—skinwerestudied州廿lre-sponsesurfacemethod．TheresultsshowedthattheoptimumconditionswereconcentrationofenzymeO．054％．treatingmaterialsunder16．32％for10．43handundertheconditions，theextractionratewas27

4、．53％，whichwas22_3％higherthanthatofthehighestofsinglefactorexperiment．StudywithSDS—PAGEshowedthattheextractedcollagenswerehighlypurifiedandconsi~edofchainsofctl，et2，whosemolecularweight0fwasI13kDaand110kDa，respectively．Keywords：cod(Gadusmorrhua)fish—skin；collagen；responsesurfacemethod胶原蛋白(collagen

5、)又称胶原，是由3条肽链拧成的螺烯酰胺(Bis)，溴酚蓝，考马斯亮蓝R一250，过硫酸铵，旋形纤维状蛋白质，是一种糖蛋白，分子含糖及大量甘氨N，N，N’，N’一四甲基乙二胺(TEMED)等。酸、脯氨酸、经脯氨酸等。其可为表皮细胞的迁移、增殖铺1_3试验仪器垫支架，并提供良好的营养，具有保护、支持人体组织与骨722s分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，骼张力强度并具有粘性、弹性等特性，可作为医学材料用ALl04电子天平(梅特勒．托利多仪器有限公司)，RJM．2．8．在骨科、整形外科、皮肤科、心脏血管外科、神经外科、牙科10马福炉(沈阳市电炉厂)，KDN．05A蛋白质测定仪(上海及眼科中

6、【”。贝特仪电设备厂)，JM．250d,型电泳仪(大连捷迈科贸有限1967年，LEACHAA嘲对鱼胶原的组成、氨基酸序列公司)，垂直电泳槽(大连捷迈科贸有限公司)，GTL一16A及结构作了较深入的研究，证明了鱼皮胶原与哺乳动物胶高速离心机(上海浦东物理光学仪器厂)。原类似。KIMURAS等[在某些鱼类胶原中发现了哺乳动2试验方法物所不具有的仅链，由于组成和结构的原因，鱼类胶原的2．1鱼皮的预处理变性温度比哺乳动物胶原低，更易于被酶和酸碱溶液分使用前将于．20℃保存的鳕鱼皮置于冰水中融化，晾解。国外对鱼类胶原研究较多，国内关于利用鱼类原料生干切成2x5mm的碎块，在20℃以下用20％正己烷

7、浸泡鱼产胶原蛋白的研究比较少。本研究以鳕鱼皮为原料，鱼皮皮脱脂。冷水洗去有机溶剂后，将鱼皮晾干备用啊。中胶原蛋白的提取工艺和理化性质，为从水产加工废弃物2-2酶法提取胶原蛋白中大量提取胶原蛋白，并使其得到充分利用提供借鉴。准确称取一定量鱼皮，利用酸性蛋白酶在弱酸环境1试验材料下浸泡，浸泡后的鱼皮用双层纱布过滤，加5倍去离子水将1．1原料粘稠的滤液稀释，于4000xg离&,30mim，上清液于4℃保鳕鱼：市场购买，去鳞并刮去附着在鱼皮