牛磺酸拮抗高脂血症致兔动脉粥样硬化的实验研究

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1、·5498·吉林医学2010年11月第31卷第31期牛磺酸拮抗高脂血症致兔动脉粥样硬化的实验研究袁吉祥，姚成立(1．宁夏巾卫市第二人民医院，宁夏中卫755004；2．宁夏医科大学第二附属医院暨银川市第一人民医院，宁夏银川750000)[摘要]目的：观察牛磺酸拮抗高睛血症致免动脉粥样硬化(As)的作用，探讨牛磺酸拮抗高脂血症致As的机制。方法：33只新西兰大白兔，随机分成对照组、模型组、实验组分别给予不同的饮食，同时行腹主动脉内膜球囊损伤术。8周后自免耳缘静脉分别采血3nl，化验相关生物学指标处死家兔后取降主动脉至腹主动脉

2、分叉处血管。利用光镜进行形态学和免疫组化方面的分析．结果：模型组与实验组比较．兔血浆TG、TC、LDL—C、OX—LDL、ET一1、MMP一9、ROS值均明显下降(P<0．05)，HDL—C、NO、SOD明显升高(P<0．05)。光镜下观察实验组病变较模型组明显减轻，可见数层泡沫细胞(约3—7层)。免疫组织化学结果：实验组内皮细胞膜表面及内膜可见VC．AM～】棕黄色颗粒和MMP一9黄褐色颗粒明显减少。结论：牛磺酸可以通过降血脂作用和抗氧化应激减轻内皮损伤及血管重塑，从而拮抗As。OX—LDL、胆固醇和组织中的MMP一9在

3、As形成和发展过程中可能起重要作用[关键词]牛磺酸；高脂血症；动脉粥样硬化：实验研究根据以往对动脉粥样硬化(As)研究的理论知识和实践经穿刺鞘管后，沿导丝将内径3．5mm，长15mm的球囊导管送验，牛磺酸对于As应具有良好的预防与治疗作用，但在临床人降主动脉约20cm，推注蒸馏水达8atm充盈球囊后，回拉球上圈内目前仍没有关于牛磺酸在预防与治疗As中应用的报囊至髂总动脉，反复回拉3次以造成腹主动脉内皮损伤。退道。本实验通过建立高脂血症致兔模型．观察牛磺酸列家出球囊导管后局部压迫止血，并用明胶海绵包扎血管，缝合手兔As形成

4、中血浆TG、TC、LI)L—C、1tDL—C、OX—LD[、ET—术切口。伤口处洒人庆大霉素8万U防止感染，术后继续予l、NO、MMP一9、ROS、SOD的影响，同时观察粥样斑块和内中青霉索4万u肌内注射，1次／d，共3d。膜组织形态，利用免疫组织化学法测定血管VCAM—l和1．3检验方法：兔子OX—LDL测定采用ELISA法，试剂盒由MMP～9的表达，分析这些因素对As形成的作用以及牛磺酸上海沪峰生物科技有限公司提供。ROS测定采用荧光法，试抗As的作用机制，探讨’牛磺酸防治As的可行性及其饥制，拓剂盒由江苏碧云天生物

5、技术研究所提供。SOD测定采用宽牛磺酸在预防及治疗心血管疾病中的应刖范刚EL1SA法，试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。TC、TG、HDI一C、LDL—C测定采用ELISA法，试剂盒由上海拜力1资料与方法生物科技有限公司提供。兔ET一1采用放免法测定，药盒由1．1实验动物：选择3～4月龄纯种雄性新西兰大白兔33北京北方生物技术研究所提供。NO用酶标法测定，试剂盒由只，体重2．0—2．5kg，将33只家兔随机分成3组，对照组11南京聚力生物医学研究所提供。兔MMP一9测定用ELISA只家兔普通饲料(黄豆粉10％，麦粉3

6、8％，麸皮50％，盐1％，法，试剂盒由北京尚柏生物科技有限公司提供。兔MMP一9鱼粉1％)喂养，模型组¨只家兔高脂饲料(1％胍固醇，5％猪抗体，VCAM一1抗体由北京博奥森生物技术公司提供。sP一油，15％蛋黄粉．80％的普通饲料组成)喂养，行腹主动脉内膜9000免疫组化染色试剂盒，DAB酶底物显色试剂盒，系武汉球囊损伤术，实验组l1只家兔高脂饲料喂养的同时予牛磺酸博士德生物工程有限公司产品。溶液100mg／kg灌胃，行腹主动脉内膜球蜒损伤术所有兔1．4病理检查方法：光镜：动脉标本经0．1kg／L多聚甲醛溶子分笼喂养．自

7、由饮水8周后白兔耳缘静脉采m3m1．离心液固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，4m连续切片，HE染色后l0rain，化验检查TG、TC、LDI一C、Il1)l一C、OX—L1)I、ET一于光镜下观察。免疫组织化学：VCAM一1和MMP一9分析分1、NO、MMP一9、ROS、SOD之后处死3绀家免取降主动脉至别采用免疫组织化学SABC法和SP法，DAB显色。石蜡切片腹主动脉分叉处血管甲醛溶液湖定。ttE染色后光镜观察m常规脱蜡至水，3％(体积分数)HO孵育，正常山羊廊清封管组织形态．图像分析系统测定粥样斑块面积占内膜面积的闭，顺

8、序滴加一抗工作液(VCAM一1一抗：1：80，MMP一9一百分比，免疫组化法观察腹主动脉VCAM一1、MMP一9的分抗：1：100)、二抗工作液、辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素布，紫外分光光度计测缝积分OD值，图像分析软件测定阳性工作液，DAB显色，复染，脱水，透明，封片后在光镜下观察。面积百分比。每片随机选取3个视