硫酸化茯苓多糖对prrsv体外感染marc145细胞作用的影响

《硫酸化茯苓多糖对prrsv体外感染marc145细胞作用的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据动物医学进展。2009，30(10)：23—28ProgressinVeterinaryMedicine硫酸化茯苓多糖对PRRSV体外感染Marc一145细胞作用的影响韦英益1’2，帅学宏1，胡庭俊¨，陆兰敏1，苏子杰1(1．广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005；2．南京农业大学动物医学院，江苏南京210095)摘要：用稀碱法从茯苓中提取茯苓多糖，应用氯磺酸一吡啶法得到硫酸化茯苓多糖。通过观察细胞病变(CPE)效应来评价不同浓度硫酸化茯苓多糖和不同作用方式对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Ma

2、re-145细胞的影响。结果表明，硫酸酯化茯苓多糖预作用于单层细胞12h后感染10‘TCIDsoPRRSV，能明显阻断病毒感染细胞，其阻断病毒感染作用的最小浓度为i00mg／L；而硫酸化茯苓多糖预作用4h后感染104TCID。。的PRRSV阻断感染作用不明显，显示硫酸化茯苓多糖体外对PRRSV感染细胞的阻断感染作用呈一定的浓度和时间依赖性。感染剂量为104TCID。。PRRSV后加入不同浓度硫酸化茯苓多糖，也能有效抑制病毒在细胞上的感染与增殖，其作用最小浓度为50mg／L；而不同浓度多糖与104TCIDs。病毒在体外共

3、同孵育12h后加入到单层细胞，多糖直接杀灭PRRSV的最小浓度为100mg／L。关键词：硫酸化茯苓多糖；猪繁殖与呼吸综合征病毒；细胞病变中图分类号：$852．659．6IQ539文献标识码：A文章编号：1007·5038(2009)10—0023—06猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRsv)引起的以妊娠母猪流产、各

4、种年龄猪呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。近几年来该病在许多养猪场呈潜伏性感染，常无明显的典型症状，给养猪生产造成潜在威胁，已成为目前危害养猪业健康发展的主要疫病之一[1]。该病毒可以逃避宿主免疫防御机制，并形成持续的感染，从而导致猪免疫功能低下，对其他致病因子的易感性增加。茯苓多糖(pachyman)是一种真菌多糖，来源于多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，其化学组成为(1—3)一日一D-葡聚糖，切除口(1—6)支链后即可得到茯苓多糖[2]。大量的研究表明，茯苓多糖具有抗肿瘤、抗病毒与免疫调节作用。茯苓多糖经羧甲基化可得到溶于

5、水的羧甲基茯苓多糖(carboxymethytlpachy—maram，CMP)，茯苓多糖经过硫酸酯化修饰后得到硫酸酯化茯苓多糖(sulfationpachymaranpolysac-charide，SPP)，SPP具有易溶于水的特性，具有增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒等活性[3】。SPP的研究成为新药开发领域的一个新热点。有关SPP的制备及抗肿瘤作用已有报道H】，但有关SPP对PRRSV的实验研究尚未报道。本试验利用碱提法从茯苓中提取多糖，应用氯磺酸一吡啶法得到硫酸化茯苓多糖，通过观察细胞病变效应(CPE)来评价不

6、同浓度多糖及对病毒的不同作用方式对PRRSV感染Marcel45的影响，为该病的综合防治提供资料。1材料与方法1．1材料PRRSV—GXA株嘲和Mare-145传代细胞由广西大学预防兽医学实验室提供。DMEM培养基，GIBCO公司产品，按说明书配制，加入新生小牛血清(杭州四季青公司产品)，100mL／L为细胞生长液、50mL／L为细胞维持液，再按常规量加入L-谷氨酰胺和青、链霉素(100mg／L)。胰蛋白酶(进口分装)，用D-Hark’S液配制成2．5mg／mL溶液。细胞培养瓶、96孔细胞培养板(Coring／Cost

7、ar产品)，倒置生物显微镜(NikonType120型)、COz培养箱(BBl6UV／BB5060UV型)、生物显微镜(Nikon，YSl00型)。1．2方法1．2．1茯苓多糖的提取与硫酸化修饰采用稀碱浸提法‘63提取茯苓多糖，通过氯磺酸一吡啶法吲磺化得到硫酸化茯苓多糖，并进行多糖的提取率测定、合收稿日期：2009-08-15基金项目：广西自然科学基金(桂科青0991003)；广西大学科研基金(X071026)；广西大学科研基金(x051013)作者简介：韦英益(1973一)。女，壮族．广西都安人．讲师。博士研究生．主

8、要从事免疫病理与药物病理学研究。*通讯作者万方数据24动物医学进展2009年第30卷第lo期(总第195期)成茯苓多糖硫酸酯的最优条件、硫酸化多糖的含量测定。1．2．2硫酸酯化茯苓多糖对Marc-145细胞系安全浓度测定将硫酸化茯苓多糖用细胞维持液连续倍比稀释后，加到长成单层Marc-145细胞的96孔细胞培养板中，200肛L／孔