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《亚甲蓝与硫酸化茯苓多糖相互作用机理的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、第25卷,第4期光谱学与光谱分析Vol.25,No.4,pp608-6122005年4月SpectroscopyandSpectralAnalysisApril,2005===================================================================亚甲蓝与硫酸化茯苓多糖相互作用机理的研究高贵珍1,2,焦庆才1,丁一磊1,陈雷11.南京大学生命科学学院,药物生物技术国家重点实验室,江苏南京2100932.宿州师范专科学校生化系,安徽宿州234000摘要为从分子水平认识硫酸化多糖分子与小分子之间相互作用的机理,文
2、章采用氯磺酸-吡啶法(Wolfrom法)对茯苓多糖进行结构修饰,制得硫酸化茯苓多糖(SP)。通过理论模型测得亚甲蓝(MB)与SP最大结合数N=54,结合常数K=1.563×106,考察了反应体系中MB/SP摩尔比、NaCl、乙醇、羟丙基-β-环糊精以及TritonX-100对相互作用的影响。探讨了MB与SP相互作用产生变色反应的机理,认为其是在MB与SP大分子间发生静电相互作用的基础上,结合态MB分子之间的疏水相互作用所引起的。主题词硫酸化茯苓多糖;亚甲蓝;光谱法;最大结合数中图分类号:Q539文献标识码:A文章编号:1000-0593(2005)04-0608-
3、05了MB与SP相互作用机理,通过已建立的相互作用理论模型引言计算了MB与SP的最大结合数和结合常数,考察了反应体系硫酸化多糖是多糖大分子链中单糖分子上的羟基被磺酸中不同MB/SP摩尔比、TritonX-100、乙醇、羟丙基-β-环糊基所取代而形成的一类多功能生理活性物质。天然多糖经硫精以及离子强度等因素对MB与SP相互作用的影响。本文的酸化修饰后,可能使其原有的生物活性更高或出现新的药理工作将有助于推动多糖的结构修饰及硫酸化多糖产品开发和活性。近年来发现硫酸化多糖除具有抗凝血作用外,还具有分析检测,并为从分子水平探讨硫酸化多糖生物活性机理提增强机体免疫功能、抗肿
4、瘤和抗病毒等活性,特别是抗爱滋供一种新的研究方法。病病毒活性引起许多研究者的极大兴趣[1],使硫酸化多糖的研究成为新药开发领域的一个新热点。茯苓聚糖(Pachyman)是含有少量β-(1→6)葡聚糖支链的β-(1→3)-D-葡聚糖,经化学修饰切去茯苓聚糖分子主链上的β-(1→6)葡聚糖支链后,得到β-(1→3)-D-葡聚糖,称为茯苓多糖[2](Pachymaran,化学结构如Scheme1),再对茯苓多糖硫酸化得到硫酸化茯苓多糖(SulfationPachymaran,简称SP)。未经化学结构改造的茯苓聚糖生物活性低(对肿瘤抑制率仅0.3%),不溶于水,难于对其进
5、行深入的药理研究及其临床制剂应用研究,而硫酸化茯苓多糖能溶于水,具有抗肿瘤活性,能显著抑制S180肿瘤细胞株[3]。亚甲蓝为阳离子染料(化学结构如Scheme2),通过静电作用与多聚阴离子化合物发生相互作用,吸收光谱曲线发生改变,因而可作为光谱探针来研究其与生物大分子相互作用的机理。有关硫酸化茯苓1实验部分多糖的制备及抗肿瘤作用已有实验研究[3,4],但硫酸化茯苓多糖与生物探针相互作用机理的研究工作尚未见报道。本实1.1仪器与主要试剂验室先期已对亚甲蓝、天青A与肝素、硫酸软骨素之间相互1.1.1仪器作用机理及其应用做了大量的研究工作,并建立了多糖与光UV-3000
6、分光光度计(日本Hitachi公司);Kontron谱探针相互作用的理论模型[5-10]。本文利用吸收光谱法研究Uvikon860(瑞士)分光光度计;PHS-P型酸度计(上海大中收稿日期:2003-12-20,修订日期:2004-05-10基金项目:国家科技攻关项目(2002EB020962)资助作者简介:高贵珍,女,1962年生,宿州师范专科学校生化系教授第4期光谱学与光谱分析609分析仪器厂)。在664nm处的下降和540nm处的增加均与SP浓度呈线性关1.1.2试剂及配制系,且664nm处的灵敏度比540nm处高,据此可以建立SP亚甲蓝(MB,上海新中化学厂
7、),贮液(1.340×10-3含量测定的分光光度法。mol-1·L):0.05g亚甲蓝溶于水定容至100mL。操作液(2.230-4-1×10mol·L):取5mL贮液定容至30mL。硫酸化茯苓多糖(SP,由本实验室采用氯磺酸-吡啶法对茯苓多糖进行硫酸化修饰,纯度95%),平均分子量(电泳法测)按25000Da计。贮液(4.000×10-5-1mol·L):0.1g精制SP溶于蒸馏水定容至100mL。操作液(4.000×10-7mol·-1L):取1mL贮液定容至100mL。其他试剂均为分析纯或优级纯。1.2实验方法1.2.1茯苓多糖硫酸化Fig.1Absorpt
8、ionsp
