东海海参胶原蛋白多肽的制备及清除自由基功能研究

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1、第10卷第1期中国食品学报Vo1．10No．12010年2月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyFeb．2010东海海参胶原蛋白多肽的制备及清除自由基功能研究陈卉卉于平励建荣(浙江工商大学食品与生物工程学院杭州310035)摘要以东海海参为原料，采用酶法提取胶原蛋白。选取木瓜蛋白酶、风味蛋白酶以及复合酶(木瓜一风味)，在其最佳水解条件下水解，以自由基清除率为指标，确定最佳水解时问及酶种类。研究结果表明，用木瓜蛋白酶水解4h得到的多肽清除自由基的能

2、力最强，清除率在70％以上；多肽清除羟自由基和超氧自由基的IC分别为27．8mg／mL和49．3mg／mL。通过超滤处理及DEAE琼脂糖离子交换柱(DEAESepharoseFF)分离纯化抗氧化肽得到分子质量小于5kDa的肽，其功能性最强。利用HPLC测定该肽的氨基酸含量，结果显示该肽段以甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、天冬氨酸(Asp)、精氨酸(Arg)、丝氨酸(Ser)和苏氨酸(Thr)为主关键词东海海参；胶原蛋白；多肽；自由基清除能力文章编号1009—7848(20

3、10)01—0019—07海参是一种高蛋白、低脂肪的无脊椎动物[1]。子质量小于2kD的多肽对自由基的清除能力较其营养价值十分丰富，深受人们的青睐。由于地域好。的差异，海参的品质有所不同。我国北方海域出产本文以东海海参为原料，通过酶法提取胶原的辽参、梅花参等食用价值较高，口感好．价格居蛋白．研究胶原蛋白水解产物——多肽的抗氧化高不下。东海海域出产的海参与辽参相比，外观活性，为东海海参胶原蛋白活性肽的开发与利用差，口感偏硬，市场价格低下。浙江省内没有加工提供基础数据。海参的传统，缺乏相关的加工技术，在深加工方面尚

4、属空白。目前捕获的东海海参(Acaudinamol—1材料与方法padioidesSemper)主要被山东、辽宁的客商低价1．1材料收购。有研究表明东海海参具有与刺参相似的营东海海参，宁海县东部海洋经济开发有限公养成分和生理功能，例如东海海参干品蛋白质含司出品。木瓜蛋白酶(酶活力52U／mg)，Sigma公量达57％(刺参干品蛋白质含量在67％左右)闭，司；风味蛋白酶(酶活力204U／mg)，Sigma公司；因此有很大的加工及升值空间。胃蛋白酶(酶活力3000-3500NFU／mg)，Sigma公目前，人们越来

5、越关注功能肽的研究。据文献司；其余试剂均为分析纯。报道。蛋白质水解产物——蛋白多肽具有清除自1_2主要仪器由基、抗氧化的功能。陈美珍[31等研究大豆蛋白酶紫外一可见光分光光度计(UV一2550)，日本解产物的清除羟自由基作用，其中分子质量在SHIMADZU：pH酸度计(DELTA320)，METYLERl1．553～5．154kD范围的肽清除能力较强。林琳[43TOLEDO；真空干燥箱(DZG一6090)，上海森信实验等对鱿鱼皮胶原蛋白多肽进行研究，结果发现分仪器有限公司1．3试验方法收稿日期：2009—11—

6、111．3．1胶原蛋白的制备取干东海海参样品。清基金项目：“十一五”国家863计划海洋技术领域重点项目水泡发后，用l％HC1(1：10，M)浸泡2～3d，间(No．2007AAO91806)歇搅拌。24h换1次溶液。用去离子水冲洗至pH作者简介：陈卉卉，女，1985年出生，硕士生6～7止，然后用0．03％Ca(OH)2(1：10，)浸泡通讯作者：励建荣中国食品学报2010年第1期2～3d，间歇搅拌，24h换1次溶液，用去离子水清溶液)，迅速摇匀并倒人比色杯，置25℃恒温池洗至pH中性同。中，在波长3251311

7、1处每隔30S测1次吸光值。测将处理过的东海海参在8％NaOH(1：10，定启动后，4min内样品抑制邻苯三酚自氧化的速)溶液中浸泡15min，至东海海参体壁呈透明状，率记作样，测空白样反应启动后4min内邻苯三捞出，用去离子水多次冲洗。切碎，匀浆，用胃蛋白酚自氧化速率记作。‘酶在O．1mol／L醋酸溶液中10℃限制性酶解2d。计算公式：酶解后的样品，10000r／min离心，取上清液，沉淀02-清除率=xlO0V0再次用胃蛋白酶进行限制性酶解。重复以上操作式中：厂邻苯三酚自氧化速率(AU／S)；2—3次，以提

8、高胶原蛋白的提取率。收集上清液，冷冻干燥，得到乳白色或奶黄色的胶原蛋白干品『61。——样品抑Srl~l：苯三酚自氧化(AU／S)。1-3．5酶解产物分离纯化对酶解后的产物进行1_3．2胶原蛋白酶解分别采用木瓜蛋白酶、风分离纯化。依次选取截留分子质量为30、10、5味蛋白酶以及复合蛋白酶(风味与木瓜)水解胶原kDa的超滤膜对酶解液进行超滤处理，分别得到蛋白。水解条件见表1。不同组分的肽段